一、抗猪大肠杆菌卵黄抗体变化规律及在体外对大肠杆菌生长的影响（论文文献综述）
陈海超[1]（2015）在《抗猪伪狂犬病毒卵黄抗体的制备及其保护效力的研究》文中研究说明猪伪狂犬病在欧美一些发达国家已经根除,在中国,目前只能通过疫苗接种进行预防。自2011年末以来,华北大部分地区的已接种疫苗的猪场爆发了伪狂犬病,造成了严重的经济损失,而且,爆发伪狂犬病时没有有效的药物治疗该种疾病,因此,研制有效的治疗药物对于控制猪伪狂犬病的蔓延至关重要。特异性卵黄抗体（IgY）在控制传染性的细菌或病毒疾病方面正受到大量的关注,相对于哺乳动物的IgG,IgY具有廉价、方便、高产和生物安全性好等优势,但是,目前国内外并没有应用抗猪伪狂犬病IgY的报道。本课题旨在通过制备伪狂犬病毒（PRV）灭活疫苗免疫蛋鸡来得到较高水平的抗PRV的卵黄抗体,并对制备的IgY进行体内外效果的研究,为今后抗PRV卵黄抗体用于猪伪狂犬病的治疗上提供科学依据。本课题主要研究内容如下:1抗猪伪狂犬病毒（PRV）卵黄抗体的制备及间接ELISA检测方法的建立选取24只40周龄健康的产蛋鸡（三黄鸡）,随机分成3组（A,B,C组）,每组8只。用制备的灭活疫苗免疫3组鸡群,免疫方案为:A组注射生理盐水,B组使用灭活的PRV Bartha-K61疫苗株与白油佐剂乳化后免疫鸡群,C组使用灭活的PRV Bartha-K61疫苗株与弗氏佐剂乳化后免疫鸡群。首免后间隔4周后进行第二次免疫,二免后间隔2周进行第三次免疫,共免疫3次,3次免疫接种量分别为1mL,2mL,3mL。收集免疫鸡群的鸡蛋,无菌分离蛋黄,采用水稀释、盐析和超滤法方法从蛋黄中提取和纯化IgY,SDS-PAGE检测IgY。用全病毒包被酶标板,纯化的IgY作为一抗,建立了针对抗PRV卵黄抗体的间接ELISA检测方法,用方阵滴定法确定各反应液的工作浓度及作用时间,并对检测方法的特异性、敏感性及重复性进行了评估。用该方法检测3组免疫鸡群IgY水平。结果表明:通过分离、提取和纯化各步骤,每10mL卵黄液可以得到IgY的浓度为4.6mg/mL;抗原最佳包被浓度为1:100,酶标二抗工作浓度为1:4000,临界值为0.170-0.200,建立的间接ELISA检测方法特异性强,敏感性高,重复性好;B组和C组都得到了较高水平的IgY,从整体来看,C组得到的IgY水平比B组要高。2抗PRV卵黄抗体的体内外中和试验IgY的毒性试验:将IgY倍比稀释成不同的浓度,加入到96孔细胞培养板中,加入长势良好的PK-15细胞,在荧光显微镜下观察细胞病变（CPE）情况,结果显示:IgY不会引起PK-15细胞产生CPE,具有较好的生物安全性。IgY细胞中和试验:将IgY倍比稀释成不同的浓度,加入到96孔细胞培养板中,加入200 TCID50的PRV在37℃中和1h后,再加入长势良好的PK-15细胞继续培养,观察细胞的病变情况,并提取细胞中病毒的DNA,用荧光定量PCR测定细胞中病毒的拷贝数。结果显示:IgY对PK-15细胞的半数保护PD50为0.04,说明IgY对PRV具有较强的中和活性;当IgY的浓度为575μg/mL时,阳性对照组和IgY处理组细胞中病毒的拷贝数差异显着,并且随着IgY浓度的增加,细胞中病毒的拷贝数逐渐降低。IgY小鼠体内中和试验:将36只清洁级（Balb/c）小鼠随机分成3组,每组12只。其中,阴性对照组:每只小鼠腹股沟皮下接种0.2mL生理盐水;阳性对照组:每只小鼠腹股沟皮下接种0.2mL PRV LA病毒株（TCID50为107）;试验组:将浓缩后的IgY（25.8mg/mL）与PRV病毒在37℃中和1h后,腹股沟皮下接种小鼠,0.2mL/只。于小鼠出现临床症状后采取3组小鼠血液,提取血清中DNA,用PCR检测小鼠有无发生病毒血症。当不再出现小鼠死亡后,分析小鼠的存活情况。剖杀所有小鼠,采集小鼠脑、肝脏、脾脏和肾脏,用PCR检测组织中的病毒。IgY小鼠体内中和试验表明:抗PRVIgY能为小鼠提供80%的保护率（8/10）,能有效地抑制小鼠组织中PRV的增殖。
巨晓军,杨海明,王志跃,马尹鹏,谢艳娟,蔡中梅[2]（2015）在《卵黄免疫球蛋白在畜禽生产中的研究与应用》文中提出卵黄免疫球蛋白又称卵黄抗体,是指蛋黄中存在的抗体,是母鸡血液中的免疫球蛋白传递至鸡蛋卵黄并在鸡胚孵育过程中及孵育后对雏鸡起保护作用的免疫球蛋白,对雏鸡早期生长发育作用突出。随着对卵黄免疫球蛋白研究的不断深入,卵黄免疫球蛋白在家禽、猪和反刍动物上都有了广泛的应用。目前,卵黄免疫球蛋白在畜禽生产及疾病预防治疗方面的作用越来越受到关注和重视。本文主要对卵黄免疫球蛋白的特性、作用机理及其在畜禽生产中的应用等方面作一综述。
谢江[3]（2014）在《抗仔猪病原性腹泻卵黄抗体及其纳米粒—微球的制备与评价》文中指出本研究以引起仔猪腹泻的几个主要病原:产肠毒素性大肠埃希氏菌（Enterotoxigenic Escherichia Coli,ETEC）、流行性腹泻病毒（Poricine epidemic diarrhoea,PEDV）及传染性胃肠炎病毒（Poorcine transmissible gastroenteritis,TGEV）为抗原免疫产蛋鸡,制备了抗仔猪病原性腹泻的特异性卵黄抗体（Egg Yolk Immunoglobulins,IgY）。利用微胶囊和纳米技术,制备了抗仔猪病原性腹泻的IgY纳米粒-微球,以达到提高IgY稳定性及靶向释放目的。并通过建立小鼠大肠杆菌腹泻动物模型探讨IgY及IgY纳米粒-微球对小鼠腹泻模型的预防作用。将产肠毒素性大肠埃希氏菌（K88,K99,987P）标准菌株混合制备成油乳苗,与流行性腹泻和传染性胃肠炎二联苗同时免疫产蛋鸡,监测抗体消长规律,结果发现两种疫苗相互间无干扰,三种抗体水平均能持续增长。收集含此IgY的高免蛋,水稀释法去脂后,以氯化钠盐析法进行纯化,加入氯化钠晶体浓度至1.5 mol/L,调节pH至4.0可以除去大部分杂蛋白,获得电泳纯的IgY。首先用离子交联法制备IgY壳聚糖纳米粒,再通过喷雾干燥进一步成球,制备IgY纳米粒-微球（IgY-NiSM）。以载药量和包封率为评价指标,采用响应面-星点设计法优化制备纳米粒配方,得出制备IgY壳聚糖纳米粒的最佳条件:壳聚糖溶液浓度为2.37mg/mL,壳聚糖与三聚磷酸钠质量比3.61:1,IgY的初始浓度为2.49mg/mL,在此条件下,纳米粒的包封率、载药量、平均粒径分别为53.28%、29.13%、495.8nm。调节喷雾干燥的技术参数,在进风温度175℃、蠕动泵进料速度30mL/min时,可制备出干燥、粉末均匀的IgY纳米粒-微球,包封率、载药量分别提高至74.15%、40.97%。电镜下其为球状颗粒,粒径为2300nm左右,在人工胃液（SGF）中2h内IgY释放度仅为8.82%,在人工肠液（SIF）中4h释放达到70%,相对活性超过55%,且在高温环境下对IgY活性具有保护作用。以临床分离致病性大肠杆菌菌株建立小鼠大肠杆菌腹泻模型,并利用该模型对IgY及其纳米粒-微球效果进行评价,结果表明IgY及其纳米粒-微球对大肠杆菌诱导的小鼠腹泻具有明显的预防作用。
李建[4]（2013）在《新城疫和禽流感精制卵黄抗体的制备及其应用研究》文中研究表明新城疫和禽流感是目前危害我国养禽业的两大主要传染病，目前预防治疗这两种疾病的主要手段是疫苗防疫和化学药物的辅助治疗。随着人们对食品安全问题越来越关注，化学药物和抗生素药物的辅助治疗受到限制。抗体属于被动免疫，具有安全、特异、高效、无残留等优点，在临床上具有良好的预防治疗疾病的作用。本研究利用常规方法免疫产蛋鸡获得高免鸡蛋，然后，比较利用泊洛沙姆辛酸法、海藻酸钠辛酸法和聚乙二醇法提取、纯化卵黄中的抗体。最终筛选出利用聚乙二醇法提取抗体效果最优，采用该方法提纯的精制卵黄抗体去脂彻底、抗体性状稳定、效价高，抗体回收率可达88.4%。为确定精制卵黄抗体的生物活性，采用固定病毒稀释抗体的方法分别对新城疫、禽流感H9N2和H5（RE-4）等病毒进行鸡胚中和试验，测定其抗体中和效价。测得精制卵黄抗体的中和效价分别为：新城疫为1:16384，H9N2为1:11068834，H5（RE-4）为1:16384，均表现出了非常强的病毒中和能力。而在精制卵黄抗体中，新城疫、禽流感H9N2和H5（RE-4）分别对应的HI效价分别为1:4096、1:8192、1:256。比较发现：精制卵黄抗体的HI效价均远远低于其对应的病毒中和效价。该结果进一步提示：精制卵黄抗体的病毒中和能力不能完全利用HI效价来衡量。对血清的重复检测亦得出类似的结论。此外，我们还对精制卵黄抗体的不同接种方式和途径及其抗体在体内的消长规律进行了研究。选取60日龄的SPF鸡60只，随机分成三组：注射试验组，口服试验组和对照组，注射试验组肌肉注射精制卵黄抗体，1mL/只；口服实验组，人工口服精制卵黄抗体1mL/只。结果发现：/肌肉注射组的ND、H5（RE-4和RE-6）和H9N2抗体在注射后14d内，各时间点的抗体水平均显着高于对照组（P＜0.01）；且注射后抗体滴度快速达到峰值，高抗体水平可维持7d，此后缓慢下降。新城疫和禽流感H9亚型抗体消长规律比较类似。RE-4和RE-6两种不同遗传进化分支的抗体相对较低。口服抗体效果较差，与空白对照无差异。为确定精制卵黄抗体对鸡群的保护性，选取100只60日龄的SPF鸡随机分成5组，以新城疫为例，进行治疗保护试验，其中设预防组、高剂量治疗组、低剂量治疗组、阴性对照试验组和阳性对照实验组。预防实验组在攻毒前1d肌肉注射精制卵黄抗体1.0mL/只；高剂量组在攻毒后48h肌肉注射精制卵黄抗体1.0mL/只；低剂量实验组在攻毒1d后肌肉注射精制卵黄抗体0.5mL/只；阴性对照组不作任何处理，阳性对照组只进行攻毒。结果显示：精制卵黄抗体对新城疫的预防保护效果高达100%，高剂量治疗组保护率高达90%，低剂量组保护率为80%。这表明肌肉注射新城疫精制卵黄抗体具有良好的预防和治疗新城疫疫病的作用。
王荣[5]（2013）在《具有广谱抗ETEC腹泻功能鸡蛋的研制》文中研究说明肠毒素大肠杆菌（ETEC）是一种重要的腹泻致病菌,在发展中国家婴幼儿及到这些国家的旅游者的腹泻疾病中尤为多见。传统临床防治中随着菌株耐药性增强,抗生素的使用效果愈不如人意,而外源提供特异性卵黄抗体具有安全、无抗药性、制备简便等优点,成为一种具有广阔应用前景的抗生素替代品。另一方面在ETEC感染过程中,粘附是致病的首要条件,如何阻断粘附进而防止腹泻的发生是近年来研究的热点。近期研究发现两类非菌毛粘附素即鞭毛蛋白FliC和介导FliC与上皮细胞粘附的EtpA,两者在人源ETEC粘附上皮过程中起重要作用,并且这种新的粘附机制具有一定的普遍性。本研究利用构建的原核表达载体,得到FliC与EtpA蛋白,并在免疫蛋鸡后获得特异性卵黄抗体,并对卵黄抗体体外特性进行研究,通过建立小鼠肠道定植模型,验证IgY的抗粘附效果。旨在为今后广谱性抗ETEC腹泻卵黄抗体的开发与应用奠定基础。结果如下:1.以人源肠毒素大肠杆菌标准株H10407为试验材料,将PCR扩增后的目的片段连接至表达载体,成功构建了在细菌粘附上皮细胞过程中的关键基因etp4和鞭毛基因fliC以及二者融合基因的重组表达质粒,其中融合基因之间以一段疏水性连接肽（Gly4Ser）3做连接,鞭毛蛋白的串联体则利用了同尾酶的性质。逐步优化原核表达条件,三者最佳诱导表达条件为:37℃摇床培养至OD600达到0.5-1.0,加入IPTG至适宜浓度（2FliC:0.1mM,EtpA:0.1mM,EF:0.5mM）,继续培养 3-4h,最终表达量均在15%以上,最高达到50%。浓缩后得到的包涵体蛋白纯度则在70%以上。2.以20周龄罗曼蛋鸡为试验动物,每只鸡免疫剂量1mg蛋白,经过三次免疫,得到高效价的特异性免疫球蛋白。水稀释法提纯IgY,浓度在100-200mg/枚鸡蛋。以western-blot鉴定了卵黄抗体具有良好的特异性。间接ELISA检测了效价变化曲线,结果显示在二免后的第7周三种蛋白2FliC、EtpA和EF的效价分别为16000、64000和64000。融合蛋白EF组产生的IgY在ELISA检测中可分别与两种蛋白独立反应,说明融合蛋白诱导产生了双价抗体。3.在卵黄抗体的稳定性试验中,温度低于70℃或pH>3时,IgY活性保持稳定;在温度70℃以上处理,5min后即丧失80%活性;在pH=2的环境中处理0.5h后,IgY效价已呈阴性。pH=1.2的胃蛋白酶环境中则水解迅速,而胰蛋白酶对IgY活性无明显影响。4.通过建立ETEC在小鼠肠道中的定植模型,以三种临床常见的不同血清型菌株攻毒小鼠,将前期制备的卵黄抗体口服后,不同的抗体组对细菌产生了不同程度抑粘附效果。其中标准菌株H10407的抗体组（EtpA与2F）与对照组相比均有显着的抗粘附作用（P<0.05）,融合蛋白则降低了感染小鼠的数量。E519与44815不产生EtpA,但在E519攻毒后口服鞭毛蛋白2F与融合蛋白EF制备的IgY均显着抑制细菌粘附数（P=0.01）,44815感染后抗体组也有抑制粘附的趋势（P=0.09）,特别是融合蛋白EF卵黄抗体组。综上所述,原核表达EtpA与鞭毛蛋白FliC可以作为免疫原在卵黄抗体生产中应用,且性质较为稳定,并且在小鼠肠道定植试验中显示了广谱的抗粘附效果,表明卵黄抗体在ETEC腹泻的被动免疫治疗中具有广阔的应用前景。
胥桂华,苗玉和,张勇飞,米宏有[6]（2010）在《大肠杆菌病纯化冻干卵黄抗体对大肠杆菌感染新生仔猪的治疗试验及药理机制研究》文中进行了进一步梳理用仔猪大肠杆菌病纯化冻干卵黄抗体处理ETECK88、K99和987P菌株感染新生仔猪表明:本药剂中的IgY与ETEC菌毛相结合,改变了ETEC的细胞膜结构,阻止了ETEC在仔猪小肠内的定殖,妨碍了ETEC的正常代谢,最终实现了对仔猪大肠杆菌病的防治目的。
刘文鑫[7]（2010）在《大肠杆菌F4、F5天然菌毛及表达蛋白鸡卵黄抗体的制备及初步应用》文中指出仔猪黄痢、仔猪白痢是由产肠毒素性大肠杆菌引起的新生仔猪常见的传染病,主要表现为严重的腹泻、脱水,并导致大批仔猪死亡,严重影响仔猪的成活率。目前,对该病的防治主要采用大肠杆菌多价苗免疫和抗生素治疗,但防治效果均不理想。卵黄抗体作为一类可替代抗生素的高效生物防治制剂在防治新生仔猪大肠杆菌性腹泻中显示出明显的效果,为该病的防治开辟了新的途径。目前制备仔猪黄、白痢卵黄抗体多以天然菌毛为免疫原,然而,天然菌毛提取和纯化的产量不能满足大量制备卵黄抗体的需要。本研究旨在利用基因工程技术,构建表达菌毛蛋白的重组载体,并使其在大肠杆菌中高效表达,为仔猪黄、白痢卵黄抗体的免疫原的大量制备提供一种新的方法。实验分别提取了产肠毒素大肠杆菌F4、F5天然菌毛,构建并高效表达了具有良好免疫原性的F4、F5融合蛋白。以上述天然菌毛和表达蛋白作为免疫原对9月龄海兰蛋鸡进行免疫。将鸡分为A（F4菌毛）、B（F4蛋白）、C（F5菌毛）、D（F5蛋白）4组,每组9个笼,每笼3-4只。A组又分为A1、A2、A3 3组,每组3笼,按照0.25mg／只、0.5mg／只、0.75mg／只三个免疫剂量分别对A1、A2、A3组进行肌注免疫。首免2周后进行第二次加强免疫。将A1组的3个笼（A1-1、A1-2、A1-3）按照0.25mg／只、0.5mg／只、0.75mg／只三个免疫剂量分别进行免疫,A2、A3组的分组与免疫剂量和方法同A1组。二免后2周收集鸡蛋并提取卵黄抗体用试管凝集试验和ELISA检测特异性抗体效价,选择效价最高的1组进行第3次加强免疫,剂量为1.00mg／只。根据检测结果确定收蛋时机。B、C、D组的分组与免疫剂量和方法同A组。实验对氯仿法、盐酸水稀释法、辛酸-硫酸铵沉淀法和聚乙二醇沉淀法提取的卵黄抗体进行了效价比较,确定了大量制备仔猪黄、白痢卵黄抗体的提取方法,并根据《中国兽药典》要求对提取的卵黄抗体进行了相关检测。用提取的卵黄抗体对3日龄仔猪的小肠上皮细胞进行了吸附和吸附抑制试验。取新生仔猪6窝,分别灌服K88ab菌毛、K88ab蛋白、K99菌毛、K99蛋白、K88ab菌毛+K99菌毛、K88ab蛋白+K99蛋白六种卵黄抗体。每窝仔猪平均分成两组：一半灌服1：9稀释的卵黄液,另一半灌服粗提的卵黄抗体,每只每天灌服5m1,从仔猪出生时开始连灌三周,每周前三天灌服。ELISA和试管凝集试验检测结果显示,以天然菌毛和表达蛋白作为免疫原均可产生高效价的卵黄抗体。三免后第3周效价达到最高,ELISA效价最高可达1：10240,试管凝集效价可达1：5120,该卵黄抗体高水平效价可维持5周。安全性实验结果显示,该卵黄抗体达到《中国兽药典》对兽医生物制品的标准。特异性实验结果显示,该卵黄抗体可与其相应大肠杆菌发生特异性凝集,而与其它大肠杆菌则无凝集现象。体外试验结果显示,将该卵黄抗体和大肠杆菌（K88ab+、K99+）按1：1的体积比混合作用30min后,能够抑制大肠杆菌（K88ab+、K99+）对仔猪小肠上皮细胞的吸附,而未用卵黄抗体处理的大肠杆菌（K88ab+、K99+）可紧密的吸附于仔猪小肠上皮细胞表面。临床实验显示,灌服该卵黄抗体后仔猪精神状态良好。灌服抗K99蛋白1：9稀释卵黄液的仔猪只有少数发生轻微腹泻,出生后1-3周的腹泻率分别为2.86%、11.4%、0%,其余各灌服组均未发生腹泻,对照组的腹泻率分别为3.57%、10.71%、3.57%,灌服抗K99菌毛1：9稀释卵黄液和抗K99菌毛卵黄抗体组与对照组的平均体重差异显着,其他实验组与对照组的平均体重差异不显着。结果表明,以表达蛋白作为免疫原也可以制备出高效价的卵黄抗体。本实验所制备的卵黄抗体对仔猪黄、白痢具有较好的预防和治疗效果,可以进行临床应用。
谢燕燕[8]（2010）在《功能性卵黄粉的制备及其对仔猪生长性能的影响》文中进行了进一步梳理本研究以猪致病性大肠杆菌（ETEC）为抗原免疫蛋鸡,获得特异性卵黄抗体（egg yolk immunoglobulins,IgY）,制备成功能性卵黄粉。在探讨功能性卵黄粉制备及其喷雾干燥工艺参数筛选的基础上,开展功能性卵黄粉的组分特性、贮存稳定性以及其对小白鼠和仔猪生长性能的影响研究。得到如下主要研究结果:1.IgY的制备以猪ETEC为抗原免疫蛋鸡,测定首免40d后收集的鸡蛋中IgY效价均已达到1:12800以上时,可开始收集鸡蛋制备功能性卵黄粉;其后每隔60d再加强免疫一次,即可得到持续高效价IgY的鸡蛋。2.功能性卵黄粉喷雾干燥工艺参数的筛选以功能性卵黄粉的IgY效价、产品得率及感官性状等为评价指标,筛选出的功能性卵黄粉最佳喷雾干燥工艺参数。喷雾干燥温度应控制在进口温度140℃～160℃、出口温度78℃～83℃之间,在加工过程中应及时清理附积在机器干燥塔内的粉末,以保证功能性卵黄粉的高效价、高生产效率和低生产成本。3.功能性卵黄粉的稳定性试验经检测功能性卵黄粉平均水分1.5%、细菌总数156 CFU/g、大肠杆菌数0 CFU/g,符合GB 2749-2003蛋制品卫生标准要求;在60℃干热环境中贮存5d其效价不受影响;在湿热敞开环境中贮存2d即变质,4d其效价即开始下降;在常温密闭环境中贮存1年仍能维持其高效价。功能性卵黄粉应在常温、干燥、密闭的环境中保存,其保质期为1年。4.小白鼠的饲养试验小白鼠饲养试验结果表明,IgY对ETEC有明显的体外抑菌作用;制备的功能性卵黄粉对小白鼠具有促进生长、调节机体免疫功能的作用,对ETEC诱导的小白鼠肠道感染具有显着的预防和治疗作用,试验组小白鼠的死亡率比对照组的低52.3% （P<0.05）。5.仔猪饲养试验选（32±2）日龄断奶5d后的杜长大仔猪90头,公母各半,随机分成3组,每组3个重复,每个重复10头仔猪。对照组饲喂基础日粮,试验Ⅰ组和Ⅱ组在对照组日粮的基础上分别添加0.1%和0.2%的功能性卵黄粉,试验期28d。结果表明,试验Ⅰ组和Ⅱ组仔猪的日均增重分别显着高于对照组14.4%（P<0.05）和15.3%（P<0.05）;日均采食量分别提高11.70%（P>0.05）和6.86%（P>0.05）;料重比分别下降5.55%（P>0.05）和6.50%（P>0.05）;腹泻率分别极显着降低54.8%（P<0.01）和84.3%（P<0.01）,且降低了仔猪的死亡率和粪便中致病性大肠杆菌的总数;试验Ⅱ组的心脏指数比对照组提高29%（P<0.05）;3组仔猪的血液生化指标和肠绒毛形态无差异,但试验组的肠绒毛高度有增高趋势;每头仔猪的经济效益分别极显着提高67.76%（P<0.01）和86.42% （P<0.01）。表明功能性卵黄粉能有效地提高仔猪生长性能,对仔猪因ETEC而引起的消化道疾病具有防治作用,可提高仔猪养殖的经济和生态效益,具有广阔的应用前景。
刘海生[9]（2009）在《抗仔猪大肠杆菌病高免卵黄抗体粉的研制》文中提出仔猪大肠杆菌病是目前危害我国养猪业的主要传染病之一,它是由产肠毒素大肠杆菌（ETEC）引起的一种急性传染病,以急性腹泻和败血症为特征,在临床上可表现为白痢、黄痢和猪水肿病。本试验采取陕西西安、咸阳、渭南、宝鸡、榆林、汉中等地区规模化养猪厂中发生大肠杆菌病仔猪的新鲜粪便、小肠内容物、肠道等病料,通过分离纯化和生化鉴定为大肠杆菌,再进行O抗原的鉴定。试验共分离菌株294株,定型257株,血清型共计35种,其中O8、O9、O20、O45、O101、O138、O139、O141、O147、O149等10种血清型共有185株,占分离株的72%,为分离猪场中的主要流行血清型。选取试验中分离得到大肠杆菌,增菌培养,制成大肠杆菌油佐剂灭活疫苗免疫非免大肠杆菌疫苗的健康蛋鸡,用微量凝集试验检测蛋鸡血清和鸡蛋中K88、K99、987P、F41抗体水平,检测抗体变化规律并检测血清抗体和卵黄抗体二者之间的关系与变化趋势。当血清抗体水平达8log2以上时收取鸡蛋,分离卵黄,用喷雾干燥机在140℃进气72℃出气,喷雾干燥成粉。然后检测加工前后卵黄抗体水平的变化,将制备的卵黄抗体粉分低温（4℃）和室温（25℃）保存,检测保存条件对卵黄抗体效价的影响。试验结果表明:K88、K99、987P、F41蛋鸡血清和鸡蛋中卵黄抗体均在免疫之后7d开始出现,并在35d到达高峰,血清抗体和卵黄抗体二者之间的变化规律和变化趋势基本相同。卵黄抗体加工前后效价变化不大,卵黄抗体粉在4℃和25℃条件下密封保存6个月,卵黄抗体效价无明显变化,均适合卵黄抗体粉的保存。选择未经过大肠杆菌疫苗免疫母猪的新生健康仔猪50头分5组,其中四组按1g/头、2g/头、3g/头、4g/头每天饲喂,一组为对照组,进行预防试验。选择未经过大肠杆菌疫苗免疫母猪的新生健康仔猪10头分两组,利用高免卵黄抗体粉进行攻毒治疗试验。试验结果表明,2g/头以上剂量饲喂制备的高免卵黄抗体粉能有效预防仔猪大肠杆菌病,高免卵黄抗体粉对人工感染病例治愈率为90%。
贾涛[10]（2008）在《外援特异性卵黄抗体在防治仔猪大肠杆菌病中的应用》文中指出近年来由于对食品安全高度关注,对动物性食品中各种违禁药物的监测越来越严格,对于开发与使用安全、无残留、对环境无污染的新型饲料添加剂就显得尤为重要。本文就此着重介绍一种使用安全,无药物毒副作用,抗菌作用优良,对防治仔猪大肠杆菌效果显着的新型"绿色"饲料用添加剂-卵黄抗体。在实际生产中,卵黄抗体来源广泛-可从利用特定抗原多次免疫产蛋母鸡,使机体产生相应的特异性抗体,并转移、贮存在卵黄中,经提取纯化而获得;提高仔猪免疫力;降低仔猪腹泻率;降低初生仔猪死亡率均有较好的效果。随着人们对卵黄抗体认识和研究的不断深入,生产成本的降低以及标准化生产措施的施行,卵黄抗体必将有广阔的应用前景。
二、抗猪大肠杆菌卵黄抗体变化规律及在体外对大肠杆菌生长的影响（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、抗猪大肠杆菌卵黄抗体变化规律及在体外对大肠杆菌生长的影响（论文提纲范文）
（1）抗猪伪狂犬病毒卵黄抗体的制备及其保护效力的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 部分缩略词中英文对照 |
| 第一章 文献综述 |
| 1 猪伪狂犬病毒的研究进展 |
| 1.1 伪狂犬病毒的发现与命名 |
| 1.2 PRV的分子生物学特性 |
| 1.3 疫苗研究 |
| 1.4 猪伪狂犬病的治疗性研究 |
| 1.5 中国猪伪狂犬病发病情况 |
| 1.6 PRV根除策略 |
| 1.7 展望 |
| 2 卵黄抗体的研究进展 |
| 2.1 卵黄抗体的发展简史 |
| 2.2 卵黄抗体的结构及生物学特性 |
| 2.3 卵黄抗体的优势 |
| 2.4 卵黄抗体的提取、分离与纯化 |
| 2.5 IgY在生物学研究,人类和动物医学领域的应用 |
| 2.6 总结和展望 |
| 第二章 抗猪伪狂犬病毒卵黄抗体的制备及间接ELISA检测方法的建立 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 主要试剂、器材和实验动物 |
| 1.2 试剂配制 |
| 1.3 试验方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 卵黄抗体SDS-PAGE检测 |
| 2.2 间接ELISA检测方法的建立 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第三章 抗猪伪狂犬病毒卵黄抗体保护效力的研究 |
| 1 材料和方法 |
| 1.1 主要试验试剂 |
| 1.2 主要试验器材 |
| 1.3 试验动物 |
| 1.4 试剂配制 |
| 1.5 试验方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 卵黄抗体对PK-15细胞的毒性 |
| 2.2 病毒TCID_(50)的测定 |
| 2.3 中和试验结果 |
| 2.4 PCR鉴定和重组质粒的鉴定 |
| 2.5 荧光定量PCR检测 |
| 2.6 血清PCR检测 |
| 2.7 组织PCR检测 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
（2）卵黄免疫球蛋白在畜禽生产中的研究与应用（论文提纲范文）
| 1 Ig Y 的特性 |
| 2 抗细菌 Ig Y 的作用机理 |
| 3 Ig Y 在动物生产上的应用 |
| 3.1在家禽生产上的应用 |
| 3.1.1促进生长发育 |
| 3.1.2疾病预防和治疗 |
| 3.2在猪生产上的应用 |
| 3.3在反刍动物生产上的应用 |
| 4 小 结 |
（3）抗仔猪病原性腹泻卵黄抗体及其纳米粒—微球的制备与评价（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 论文常用缩写词 |
| 第一章 文献综述 |
| 1.1 卵黄抗体研究进展 |
| 1.1.1 IgY的性质特点 |
| 1.1.2 IgY的作用机理 |
| 1.1.3 IgY的制备 |
| 1.1.4 经口服IgY活性保护研究进展 |
| 1.2 纳米粒的研究进展 |
| 1.2.1 纳米粒/纳米载药体系研究进展 |
| 1.2.2 壳聚糖纳米粒研究进展 |
| 1.2.3 纳米粒-微球研究进展 |
| 1.3 本课题研究目的和意义 |
| 第二章 抗仔猪病原性腹泻IgY的制备 |
| 2.1 材料与设备 |
| 2.1.1 主要试剂 |
| 2.1.2 主要溶液配制 |
| 2.1.3 菌种及试验动物 |
| 2.1.4 主要仪器设备 |
| 2.2 方法 |
| 2.2.1 免疫原的制备 |
| 2.2.2 产蛋鸡的免疫 |
| 2.2.3 IgY的分离纯化 |
| 2.2.4 蛋白浓度测定 |
| 2.2.5 IgY纯度测定 |
| 2.2.6 IgY活性测定 |
| 2.3 结果 |
| 2.3.1 抗体消长规律 |
| 2.3.2 福林酚法测蛋白含量标准曲线的建立 |
| 2.3.3 NaCl法纯化IgY |
| 2.4 讨论 |
| 2.4.1 免疫原及免疫程序 |
| 2.4.2 NaCl盐析法提纯IgY |
| 2.5 小结 |
| 第三章 IgY纳米粒-微球的制备和体外评价 |
| 3.1 材料与设备 |
| 3.1.1 主要试剂 |
| 3.1.2 主要溶液配制 |
| 3.1.3 仪器设备 |
| 3.2 方法 |
| 3.2.1 纳米粒制备条件的初筛 |
| 3.2.2 IgY-壳聚糖纳米粒的制备 |
| 3.2.3 喷雾干燥法制备IgY纳米粒-微球 |
| 3.3 结果 |
| 3.3.1 纳米粒制备条件的初筛 |
| 3.3.2 IgY-壳聚糖纳米粒的制备及优化 |
| 3.3.3 IgY纳米粒-微球的制备 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 小结 |
| 第四章 卵黄抗体及其纳米粒-微球效果评价 |
| 4.1 材料及设备 |
| 4.1.1 试验动物 |
| 4.1.2 菌种 |
| 4.1.3 主要试剂 |
| 4.1.4 主要溶液配制 |
| 4.1.5 仪器设备 |
| 4.2 方法 |
| 4.2.1 大肠杆菌小鼠腹泻模型的建立 |
| 4.2.2 IgY及其纳米粒-微球对大肠杆菌诱导的小鼠腹泻的预防试验 |
| 4.2.3 数据分析处理 |
| 4.3 结果 |
| 4.3.1 IgY对小鼠生理指标的影响 |
| 4.3.2 大肠杆菌分离鉴定结果 |
| 4.3.3 大肠杆菌生长曲线绘制 |
| 4.3.4 大肠杆菌特异性IgY的体外抑菌试验结果 |
| 4.3.5 大肠杆菌小鼠腹泻模型的建立 |
| 4.3.6 IgY及其纳米粒-微球对大肠杆菌诱导的小鼠腹泻的预防试验结果 |
| 4.4 讨论 |
| 4.4.1 IgY对小鼠生理指标的影响 |
| 4.4.2 大肠杆菌特异性IgY的体外抑菌试验 |
| 4.4.3 大肠杆菌小鼠模型的建立 |
| 4.4.4 小鼠预防试验 |
| 4.5 小结 |
| 全文总结 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间发表论文情况 |
（4）新城疫和禽流感精制卵黄抗体的制备及其应用研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 1 前言 |
| 1.1 卵黄抗体的研究进展 |
| 1.1.1 卵黄抗体的产生 |
| 1.1.2 卵黄抗体的结构特点 |
| 1.1.3 卵黄抗体的生物学特点 |
| 1.1.4 IgY 的作用机理 |
| 1.1.5 卵黄抗体的应用进展 |
| 1.1.6 卵黄抗体的主要提取方法 |
| 1.1.7 卵黄抗体的保护剂 |
| 1.2 新城疫和禽流感的研究进展 |
| 1.2.1 新城疫 |
| 1.2.2 禽流感 |
| 1.3 立题目的和意义 |
| 2 材料和方法 |
| 2.1 材料 |
| 2.1.1 试验动物 |
| 2.1.2 试验所用疫苗及检测抗体所用抗原 |
| 2.1.3 实验试剂 |
| 2.1.4 实验仪器 |
| 2.2 方法 |
| 2.2.1 精制卵黄抗体的制备提取试验 |
| 2.2.2 ND-AI 精制卵黄抗体分别中和 NDV 和 AIV 能力的测定 |
| 2.2.3 不同途径接种外源性 ND-AI 精制卵黄抗体在 SPF 鸡体内的消长规律 |
| 2.2.4 外源性注射 ND-AI 精制卵黄抗体对 SPF 鸡的保护实验 |
| 3 实验结果分析 |
| 3.1 精制卵黄抗体的制备提取 |
| 3.1.1 高免蛋的获得 |
| 3.1.2 泊洛沙姆法提取精制卵黄抗体 |
| 3.1.3 不同稀释倍数对海藻酸钠法提取 IgY 的影响 |
| 3.1.4 PEG6000 法提取精制卵黄抗体的效果 |
| 3.1.5 比较三种方法提取精制卵黄抗体的效果 |
| 3.1.6 超滤精制卵黄抗体溶液前后的效价变化 |
| 3.2 新城疫和禽流感精制卵黄抗体的中和病毒能力 |
| 3.2.1 抗体 HI 效价 |
| 3.2.2 病毒含量 |
| 3.2.3 精制卵黄抗体和血清抗体中和效价测定结果 |
| 3.2.4 抗体的中和效价与 HI 效价比较结果 |
| 3.3 注射精制卵黄抗体后血清抗体效价变化 |
| 3.3.1 新城疫抗体变化 |
| 3.3.2 禽流感不同亚型 H_5N_1（RE-4 和 RE-6）和 H_9N_2抗体变化 |
| 3.3.3 肌注新城疫和禽流感 3 种亚型抗体后血清中抗体的消长规律动态比较 |
| 3.3.4 口服精制卵黄抗体后血清新城疫和禽流感抗体变化 |
| 3.4 注射精制卵黄抗体对 SPF 鸡的保护实验结果 |
| 3.4.1 无菌检验结果及抗体 HI 效价 |
| 3.4.2 攻毒鸡的发病症状及剖检变化 |
| 3.4.3 精制卵黄抗体对攻毒鸡的防治效果 |
| 4 讨论 |
| 4.1 关于精制卵黄抗体的制备 |
| 4.1.1 获得高免鸡蛋 |
| 4.1.2 用海藻酸钠提取抗体时不同稀释倍数的比较 |
| 4.1.3 不同方法提取抗体效果的比较 |
| 4.1.4 超滤可对精制卵黄抗体溶液起到浓缩作用的同时去除杂蛋白 |
| 4.2 精制卵黄抗体中和病毒能力 |
| 4.2.1 精制卵黄抗体具有较高的中和效价 |
| 4.2.2 精制卵黄抗体的中和效价高于 HI 效价 |
| 4.2.3 精制卵黄抗体的中和效价与 HI 效价成正相关 |
| 4.3 注射精制卵黄抗体对 SPF 鸡体内抗体水平的影响 |
| 4.3.1 注射抗体可极显着提高血清抗体滴度 |
| 4.3.2 口服抗体吸收效果不佳 |
| 4.3.3 注射精制卵黄抗体具有较好的时效性和半衰期 |
| 4.4 精制卵黄抗体对攻毒 SPF 鸡具有良好的保护效果 |
| 4.4.1 精制卵黄抗体的无菌处理 |
| 4.4.2 高剂量精制卵黄抗体对新城疫的治疗效果 |
| 4.4.3 低剂量精制卵黄抗体对新城疫的治疗效果 |
| 4.4.4 精制卵黄抗体的预防保护效果 |
| 5 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者发表论文情况 |
（5）具有广谱抗ETEC腹泻功能鸡蛋的研制（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 缩略语表 |
| 文献综述 |
| 1 前言 |
| 2 肠毒素大肠杆菌腹泻及其防治 |
| 2.1 肠毒素大肠杆菌生物学特性 |
| 2.2 肠毒素大肠杆菌腹泻的流行病学 |
| 2.3 肠毒素大肠杆菌致病机理 |
| 2.3.1 菌毛粘附素(Fimbrial adhesins) |
| 2.3.2 非菌毛粘附素(Non-fimbrial adhesins) |
| 2.3.3 肠毒素 |
| 2.4 肠毒素大肠杆菌腹泻的防治 |
| 2.4.1 肠毒素大肠杆菌的临床症状与鉴定 |
| 2.4.2 防治ETEC腹泻的疫苗研究进展 |
| 2.4.3 临床治疗 |
| 3 卵黄抗体的研究进展 |
| 3.1 发现和发展 |
| 3.2 分子结构 |
| 3.3 生物化学性质 |
| 3.3.1 理化性质 |
| 3.3.2 卵黄抗体的稳定性 |
| 3.3.2 卵黄抗体在应用上的优点 |
| 3.4 分离纯化方法 |
| 3.5 IgY应用的研究进展 |
| 3.5.1 IgY在动物疾病上的研究进展 |
| 3.5.2 IgY在人类食品和医学中的应用 |
| 3.6 制备IgY免疫原的选择 |
| 4 研究目的和意义 |
| 试验一 肠毒素大肠杆菌鞭毛蛋白和EtpA的克隆表达 |
| 1 前言 |
| 2 材料和方法 |
| 2.1 菌株和质粒 |
| 2.2 主要仪器设备 |
| 2.3 主要试剂和试剂盒 |
| 2.4 溶液配制 |
| 2.4.1 细菌DNA提取相关溶液 |
| 2.4.2 培养基 |
| 2.4.3 DNA凝胶电泳相关溶液 |
| 2.4.4 SDS-PAGE电泳相关溶液 |
| 2.4.5 包涵体纯化相关试剂 |
| 2.5 实验方法 |
| 2.5.1 细菌DNA的提取 |
| 2.5.2 引物设计 |
| 2.5.3 PCR扩增目的基因 |
| 2.5.4 PCR产物检测与回收 |
| 2.5.5 DNA片段的克隆 |
| 2.5.6 构建表达质粒 |
| 2.5.7 诱导表达 |
| 2.5.8 SDS-PAGE检测蛋白 |
| 2.5.9 包涵体复性 |
| 3 结果与分析 |
| 3.1 PCR扩增目的片段 |
| 3.2 构建目的片段表达载体 |
| 3.3 蛋白的诱导表达及条件优化 |
| 3.3.1 目的蛋白的诱导表达 |
| 3.3.2 目的蛋白的可溶性分析 |
| 3.3.3 目的蛋白诱导表达条件优化 |
| 3.4 包涵体的提取 |
| 4 讨论 |
| 4.1 表达载体的选择 |
| 4.2 基因序列对蛋白表达的影响 |
| 4.3 诱导条件对蛋白表达的影响 |
| 5 小结 |
| 试验二 卵黄抗体的制备与稳定性研究 |
| 1 前言 |
| 2 材料和方法 |
| 2.1 实验动物 |
| 2.2 主要仪器设备 |
| 2.3 试剂 |
| 2.4 溶液配制 |
| 2.4.1 免疫蛋鸡相关试剂 |
| 2.4.2 ELISA相关试剂 |
| 2.4.3 western-blot相关试剂 |
| 2.5 试验方法 |
| 2.5.1 蛋白油乳苗的制备 |
| 2.5.2 免疫蛋鸡 |
| 2.5.3 间接ELISA测定卵黄抗体效价 |
| 2.5.4 western-blot检测蛋白免疫原性 |
| 2.5.5 卵黄抗体的纯化 |
| 2.5.6 制备喷雾干燥全蛋粉 |
| 2.5.7 卵黄抗体的热稳定性研究 |
| 2.5.8 卵黄抗体的酸稳定性研究 |
| 2.5.9 卵黄抗体的酶解稳定性研究 |
| 3 结果与分析 |
| 3.1 最佳抗原包被浓度的确定 |
| 3.2 卵黄抗体效价随时间的变化规律 |
| 3.3 抗融合蛋白卵黄抗体的效价鉴定 |
| 3.4 卵黄抗体的凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定分析 |
| 3.5 Western-Blot鉴定卵黄抗体的特异性 |
| 3.6 IgY稳定性研究 |
| 3.6.1 热稳定性 |
| 3.6.2 酸稳定性 |
| 3.6.3 酶解稳定性 |
| 4 讨论 |
| 4.1 卵黄抗体的提纯 |
| 4.2 卵黄抗体在蛋鸡体内产生和发展规律 |
| 4.3 IgY的稳定性研究 |
| 5 小结 |
| 试验三 卵黄抗体的抗粘附效果研究 |
| 1 前言 |
| 2 材料和方法 |
| 2.1 试验动物 |
| 2.2 菌株 |
| 2.3 试验材料 |
| 2.5 方法 |
| 2.5.1 小鼠攻毒试验 |
| 2.5.2 数据分析 |
| 3 结果与分析 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 结语 |
| 1 结论 |
| 2 创新点 |
| 3 本研究不足之处 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
（6）大肠杆菌病纯化冻干卵黄抗体对大肠杆菌感染新生仔猪的治疗试验及药理机制研究（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 药品及试剂 |
| 1.2.1 试验菌株 |
| 1.2.2 标准抗原 |
| 1.2.3 供试血清 |
| 1.2.4 供试药品 |
| 1.2.5 供试试剂 |
| 1.3 实验方法 |
| 1.3.1 仔猪大肠杆菌病纯化冻干卵黄抗体中Ig Y效价的测定 |
| 1.3.1. 1 常规试管凝效价测定方法 |
| 1.3.1. 2 Dot-ELISA效价测定方法 |
| 1.3.2 攻毒及治疗 |
| 1.3.3 ETEC的分离和确认 |
| 1.3.4 免疫酶标组织化学法 |
| 1.3.5 卵黄抗体在体外抑制大肠杆菌吸附猪小肠黏膜细胞试验 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 仔猪大肠杆菌病纯化冻干卵黄抗体中Ig Y效价 |
| 2.2 仔猪大肠杆菌病纯化冻干卵黄抗体处理攻毒感染仔猪临床反应 |
| 2.3 粪便中ET EC菌株排泄状况 |
| 2.4 小肠中ET EC鉴定 |
| 2.5 免疫酶标组织化学法鉴定结果 |
| 2.6 抗猪大肠杆菌卵黄抗体对大肠杆菌在肠黏膜细胞上粘附的影响 |
| 3 讨论 |
（7）大肠杆菌F4、F5天然菌毛及表达蛋白鸡卵黄抗体的制备及初步应用（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 1 引言 |
| 1.1 大肠杆菌性哺乳仔猪腹泻概述 |
| 1.2 致仔猪腹泻大肠杆菌的主要毒力因子 |
| 1.2.1 肠毒素性大肠杆菌菌毛 |
| 1.2.2 肠毒素 |
| 1.3 大肠杆菌性仔猪腹泻的防治 |
| 1.3.1 疫苗免疫 |
| 1.3.2 药物防治 |
| 1.3.3 卵黄抗体防治 |
| 1.4 卵黄抗体的研究进展 |
| 1.4.1 卵黄抗体的结构 |
| 1.4.2 卵黄抗体的特点 |
| 1.4.3 卵黄抗体的优越性 |
| 1.4.4 卵黄抗体的应用 |
| 1.4.5 卵黄抗体应用中存在的问题 |
| 1.5 研究目的与意义 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 菌株和实验动物 |
| 2.1.2 PCR扩增引物 |
| 2.1.3 主要试剂 |
| 2.1.4 主要仪器 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 大肠杆菌K88ab、K99天然菌毛的提取 |
| 2.2.2 大肠杆菌K88ab及K99菌毛蛋白的表达 |
| 2.2.3 K88ab蛋白、菌毛Western blot鉴定 |
| 2.2.4 K99蛋白、菌毛Western blot鉴定 |
| 2.2.5 免疫程序设定 |
| 2.2.6 卵黄抗体的提取 |
| 2.2.7 卵黄抗体安全检验 |
| 2.2.8 卵黄抗体效价的检测 |
| 2.2.9 卵黄抗体特异性检验 |
| 2.2.10 卵黄抗体效力评价 |
| 2.2.11 保存期实验 |
| 3 结果 |
| 3.1 K88ab、K99菌毛的鉴定 |
| 3.1.1 K99菌毛的提取 |
| 3.1.2 K99菌毛浓度测定 |
| 3.1.3 K88ab菌毛的提取 |
| 3.1.4 K88ab菌毛浓度测定 |
| 3.2 K88ab及K99菌毛蛋白的表达与鉴定 |
| 3.2.1 K88ab、K99基因的克隆 |
| 3.2.2 K88ab、K99重组质粒的PCR及双酶切鉴定 |
| 3.2.3 K88ab、K99重组表达质粒的构建和鉴定 |
| 3.2.4 K88ab、K99重组菌毛蛋白的表达 |
| 3.2.5 K88ab、K99重组菌毛蛋白的纯化 |
| 3.2.6 K88ab菌毛和K88ab重组蛋白的Western blot检测 |
| 3.2.7 K99菌毛和K99重组蛋白的Western blot检测 |
| 3.3 卵黄抗体效价的检测 |
| 3.3.1 间接ELISA方法的建立 |
| 3.3.2 不同方法提取的卵黄抗体效价比较 |
| 3.3.3 第三次免疫后卵黄抗体效价 |
| 3.4 卵黄抗体特异性检验 |
| 3.5 卵黄抗体安全检验 |
| 3.5.1 物理性状检验 |
| 3.5.2 无菌检验 |
| 3.5.3 支原体检验 |
| 3.5.4 安全检验 |
| 3.6 体外吸附与吸附抑制实验 |
| 3.6.2 体外吸附抑制实验 |
| 3.7 预防试验 |
| 3.8 治疗试验 |
| 3.9 保存期实验 |
| 4 讨论 |
| 4.1 卵黄抗体在预防仔猪腹泻方面的应用前景 |
| 4.2 不同免疫原的比较 |
| 4.3 卵黄抗体各种提取方法的优缺点比较 |
| 4.4 高免卵黄液和粗提卵黄抗体比较 |
| 5 结论 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 |
（8）功能性卵黄粉的制备及其对仔猪生长性能的影响（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一章 文献综述 |
| 1 前言 |
| 2 卵黄抗体(IgY) |
| 2.1 IgY 的形成 |
| 2.2 IgY 的分子结构 |
| 2.3 IgY 的功能 |
| 2.4 IgY 的特点 |
| 3 IgY 在仔猪养殖中的应用 |
| 3.1 IgY 防治仔猪腹泻的机理 |
| 3.2 IgY 在防治仔猪ETEC 上的应用 |
| 4 本课题的目的意义和主要研究内容 |
| 4.1 本课题的目的意义 |
| 4.2 本课题研究的主要内容 |
| 第二章 功能性卵黄粉制备和贮存稳定性研究 |
| 第一部分 IgY 制备和功能性卵黄粉制备工艺优化 |
| 1 材料 |
| 1.1 制备抗原 |
| 1.2 培养基和试剂 |
| 1.3 主要设备 |
| 2 方法 |
| 2.1 鸡群的选择 |
| 2.2 免疫程序及鸡蛋抗体效价监测 |
| 2.3 IgY 效价检测方法 |
| 2.4 功能性卵黄粉的制备和效价检测 |
| 2.5 功能性卵黄粉在干燥塔内存留时间对其效价影响 |
| 2.6 喷雾干燥温度对功能性卵黄粉效价的影响 |
| 2.7 喷雾干燥温度对功能性卵黄粉生产效率的影响 |
| 2.8 卵清粉的制备和效价检测 |
| 3 结果与分析 |
| 3.1 IgY 产生规律 |
| 3.2 功能性卵黄粉在干燥塔内的存留时间对其效价的影响 |
| 3.3 喷雾干燥温度对功能性卵黄粉效价的影响 |
| 3.4 喷雾干燥温度对功能性卵黄粉生产效率的影响 |
| 3.5 卵清粉的ELISA 检测结果 |
| 4 讨论 |
| 4.1 影响IgY 产生的主要因素 |
| 4.2 IgY 产生规律 |
| 4.3 功能性卵黄粉生产工艺的优化 |
| 5 小结 |
| 第二部分 功能性卵黄粉贮存稳定性的研究 |
| 1 材料 |
| 1.1 功能性卵黄粉 |
| 1.2 培养基和试剂 |
| 1.3 主要设备 |
| 2 方法 |
| 2.1 功能性卵黄粉组分的检测方法 |
| 2.2 不同喷雾干燥温度对功能性卵黄粉组分的影响 |
| 2.3 功能性卵黄粉的细菌总数检测方法 |
| 2.4 高温干燥环境对功能性卵黄粉贮存稳定性的影响 |
| 2.5 高温高湿环境对功能性卵黄粉贮存稳定性的影响 |
| 2.6 常温条件下对功能性卵黄粉贮存稳定性的影响 |
| 2.7 统计方法 |
| 3 结果与分析 |
| 3.1 不同喷雾干燥温度对功能性卵黄粉组分的影响 |
| 3.2 功能性卵黄粉的细菌总数检测 |
| 3.3 高温干燥环境对功能性卵黄粉贮存稳定性的影响 |
| 3.4 高温高湿环境对功能性卵黄粉贮存稳定性的影响 |
| 3.5 常温干燥环境对功能性卵黄粉贮存稳定性的影响 |
| 4 讨论 |
| 4.1 不同喷雾干燥温度对功能性卵黄粉组分的影响 |
| 4.2 功能性卵黄粉的细菌总数的检测 |
| 4.3 高温干燥环境对功能性卵黄粉贮存稳定性的影响 |
| 4.4 高温高湿环境对功能性卵黄粉贮存稳定性的影响 |
| 4.5 常温干燥环境对功能性卵黄粉贮存稳定性的影响 |
| 5 小结 |
| 第三章 动物试验研究 |
| 试验一 小白鼠试验 |
| 1 材料 |
| 1.1 菌株 |
| 1.2 功能性卵黄粉 |
| 1.3 试验动物 |
| 1.4 培养基和试剂 |
| 1.5 主要设备 |
| 2 方法 |
| 2.1 小白鼠致死剂量测定 |
| 2.2 IgY 的体外抑菌试验 |
| 2.3 IgY 的动物保护试验 |
| 2.4 功能性卵黄粉对小白鼠的饲养研究 |
| 2.5 数据的分析处理 |
| 3 结果与分析 |
| 3.1 小白鼠致死量的确定 |
| 3.2 IgY 的体外抑菌试验 |
| 3.3 IgY 的动物保护试验 |
| 3.4 功能性卵黄粉对小白鼠的饲养效果研究 |
| 4 讨论 |
| 4.1 小白鼠最小致死量确定 |
| 4.2 IgY 的体外抑菌试验 |
| 4.3 IgY 的动物保护试验 |
| 4.4 功能性卵黄粉对小白鼠饲养研究 |
| 5 小结 |
| 试验二 功能性卵黄粉对仔猪生长性能的影响 |
| 1 材料 |
| 1.1 功能性卵黄粉 |
| 1.2 试验动物 |
| 1.3 培养基和试剂 |
| 1.4 主要设备 |
| 2 方法 |
| 2.1 试验设计、试验猪的选择、分组和日粮组成 |
| 2.2 饲养管理 |
| 2.3 试验仔猪平均日增重、平均日采食量和料重比的测定 |
| 2.4 试验仔猪腹泻率和死亡率的测定 |
| 2.5 粪便细菌总数检测 |
| 2.6 血液生化指标检测 |
| 2.7 脏器指数的测定 |
| 2.8 肠绒毛高度、隐窝深度和V/C 比值的测定 |
| 2.9 试验各组经济效益比较 |
| 2.10 数据分析处理 |
| 3 结果与分析 |
| 3.1 功能性卵黄粉对仔猪平均日增重、平均日采食量和料重比的影响 |
| 3.2 功能性卵黄粉对仔猪腹泻率、腹泻指数和死亡率的影响 |
| 3.3 功能性卵黄粉对仔猪粪便细菌总数的影响 |
| 3.4 仔猪血液生化指标的检测结果 |
| 3.5 功能性卵黄粉对仔猪脏器指数的影响 |
| 3.6 功能性卵黄粉对仔猪肠绒毛高度、隐窝深度和V/C 比值的影响 |
| 3.7 试验各组经济效益比较 |
| 4 讨论 |
| 4.1 功能性卵黄粉对仔猪生长性能的影响 |
| 4.2 功能性卵黄粉对控制仔猪腹泻的作用 |
| 4.3 功能性卵黄粉对仔猪血液生化指标的影响 |
| 4.4 功能性卵黄粉对仔猪脏器指数的影响 |
| 4.5 功能性卵黄粉对仔猪肠组织结构的影响 |
| 4.6 各组经济效益的比较 |
| 5 小结 |
| 结论和展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
（9）抗仔猪大肠杆菌病高免卵黄抗体粉的研制（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 文献综述 |
| 第一章 仔猪大肠杆菌病的研究进展 |
| 1.1 病原学 |
| 1.1.1 形态结构及染色特性 |
| 1.1.2 培养特性 |
| 1.1.3 生化特性 |
| 1.1.4 抗原结构及血清学特性 |
| 1.1.5 致病性和毒力因子 |
| 1.1.6 ETEC 致病机制 |
| 1.1.7 微生物学诊断 |
| 1.2 仔猪大肠杆菌病 |
| 1.2.1 仔猪大肠杆菌病临床症状 |
| 1.2.2 传播途径和流行特点 |
| 1.2.3 引起本病的主要病因 |
| 1.2.4 大肠杆菌病的防治 |
| 第二章 卵黄抗体的研究进展 |
| 2.1 分子结构 |
| 2.2 理化特性 |
| 2.3 卵黄免疫球蛋白(IGY)的提取纯化 |
| 2.3.1 IgY 的粗提方法 |
| 2.3.2 IgY 的纯化 |
| 2.4 卵黄抗体的应用 |
| 2.4.1 IgY 在食品中的应用 |
| 2.4.2 IgY 在医学上的应用 |
| 2.5 抗仔猪大肠杆菌IGY 的研究 |
| 2.6 前景展望 |
| 试验研究 |
| 第三章 仔猪大肠杆菌病病原的分离与鉴定 |
| 3.1 实验材料 |
| 3.1.1 病料来源 |
| 3.1.2 主要培养基及其配制 |
| 3.1.3 主要药品与试剂 |
| 3.1.4 主要培养基的配制 |
| 3.1.5 主要实验器材 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.2.1 病原菌的分离 |
| 3.2.2 革兰氏染色镜检 |
| 3.2.3 生理生化鉴定 |
| 3.2.4 血清型鉴定 |
| 3.2.5 分离菌株的菌种保存 |
| 3.3 结果与分析 |
| 3.3.1 细菌形态与培养特性 |
| 3.3.2 细菌分离结果 |
| 3.3.3 血清型的鉴定 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 小结 |
| 第四章 高免卵黄粉的研制 |
| 4.1 实验材料 |
| 4.1.1 菌种 |
| 4.1.2 血清 |
| 4.1.3 主要试剂和培养基 |
| 4.2 方法 |
| 4.2.1 大肠杆菌油佐剂灭活疫苗的制备 |
| 4.2.2 蛋鸡的免疫 |
| 4.2.3 抗体水平的检测 |
| 4.2.4 高免卵黄抗体粉的加工 |
| 4.2.5 加工前后卵黄抗体效价测定 |
| 4.2.6 保存温度和时间对卵黄抗体粉抗体效价的影响 |
| 4.3 结果及讨论 |
| 4.3.1 大肠杆菌油佐剂灭活疫苗 |
| 4.3.2 蛋鸡血清抗体水平检测 |
| 4.3.3 鸡蛋中卵黄抗体水平检测 |
| 4.3.4 卵黄抗体与血清抗体的消长规律 |
| 4.3.5 加工前后卵黄抗体的对比 |
| 4.3.6 保存时间和温度对卵黄抗体水平的影响 |
| 4.4 讨论 |
| 第五章 高免卵黄抗体粉对仔猪大肠杆菌病防治效果的观察 |
| 5.1 材料 |
| 5.2 方法 |
| 5.3 结果与分析 |
| 5.4 讨论 |
| 5.5 小结 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
（10）外援特异性卵黄抗体在防治仔猪大肠杆菌病中的应用（论文提纲范文）
| 1 卵黄抗体的特点[1-3] |
| 2 作用机理 |
| 2.1 直接抑制病原菌生长 |
| 2.2 间接抑制病原菌生长 |
| 2.3 抢占结合位点 |
| 3 防治效果 |
| 4 影响卵黄抗体使用效果的因素 |
| 5 小结 |
四、抗猪大肠杆菌卵黄抗体变化规律及在体外对大肠杆菌生长的影响（论文参考文献）
- [1]抗猪伪狂犬病毒卵黄抗体的制备及其保护效力的研究[D]. 陈海超. 南京农业大学, 2015(06)
- [2]卵黄免疫球蛋白在畜禽生产中的研究与应用[J]. 巨晓军,杨海明,王志跃,马尹鹏,谢艳娟,蔡中梅. 动物营养学报, 2015(03)
- [3]抗仔猪病原性腹泻卵黄抗体及其纳米粒—微球的制备与评价[D]. 谢江. 广西大学, 2014(07)
- [4]新城疫和禽流感精制卵黄抗体的制备及其应用研究[D]. 李建. 山东农业大学, 2013(05)
- [5]具有广谱抗ETEC腹泻功能鸡蛋的研制[D]. 王荣. 华中农业大学, 2013(06)
- [6]大肠杆菌病纯化冻干卵黄抗体对大肠杆菌感染新生仔猪的治疗试验及药理机制研究[J]. 胥桂华,苗玉和,张勇飞,米宏有. 中国动物保健, 2010(07)
- [7]大肠杆菌F4、F5天然菌毛及表达蛋白鸡卵黄抗体的制备及初步应用[D]. 刘文鑫. 东北农业大学, 2010(04)
- [8]功能性卵黄粉的制备及其对仔猪生长性能的影响[D]. 谢燕燕. 福建农林大学, 2010(04)
- [9]抗仔猪大肠杆菌病高免卵黄抗体粉的研制[D]. 刘海生. 西北农林科技大学, 2009(S2)
- [10]外援特异性卵黄抗体在防治仔猪大肠杆菌病中的应用[J]. 贾涛. 猪业科学, 2008(09)