实时荧光定量pcr论文摘要

问：实时荧光定量PCR的介绍

1. 答：实时荧光定量PCR （Quantitative Real-time PCR）是一种在DNA扩增反应中，以荧光化学物质测每次聚合酶链式反应（PCR）循环后产物总量的方法。通过内参或者外参法对待测样品中的特定DNA序列进行定量分析的方法。·Real-timePCR是在PCR扩增过程中，通过荧光信号，对PCR进程进行实时检测。由于在PCR扩增的指数时期，模板的Ct值和该模板的起始拷贝数存在线性关系，所以成为定量的依据。

问：实时定量PCR的结果是怎样分析的

1. 答：如果有标准曲线，按照标准曲线计算。
   一般都是相对量。则用delta delta CT方法来计算。举例如下：
   对照组基因A的CT值为20， 内参（比如βactin)CT值15。实验组基因A CT值18，内参CT值14。
   首先算加样量：delta CT=15-14=1。2的1次方是2。也就是说实验组的加样量是对照组的2倍。
   基因A: delta CT=20-18=2。2的2次方是4。也就是说基因A的量在实验组是对照组的4倍。但是由于加样量是2倍，所以4处以2=2，最后的相对量是2倍。
   几点注意：
   1。必须确定扩增的特异性
   2。 只有相同目标的CT值才能相减（扩增效率有可能不同）
   3。 2的某次方只是理论值，实际扩增效率低于2。
   4。 最好不用Syber Green
2. 答：BIOGHSC Super Probe Kit在20ul的反应体系里，只要有几个拷贝的DNA分子就能被检测出来，具有非常强的抗干扰能力，能够对土壤、粪便、肿瘤和血液来源的复杂样本中的靶基因进行检测分析，适合探针法定量PCR检测，试剂以预混液的形式包装，使用极其方便。
3. 答：1、如果有标准曲线，按照标准曲线计算。
   2、一般都是相对量，则用delta delta CT方法来计算。
   3、举例如下：对照组基因A的CT值为20， 内参（比如βactin)CT值15。实验组基因A CT值18，内参CT值14。
   4、首先算加样量：delta CT=15-14=1。2的1次方是2。也就是说实验组的加样量是对照组的2倍。基因A: delta CT=20-18=2。2的2次方是4。也就是说基因A的量在实验组是对照组的4倍。但是由于加样量是2倍，所以4处以2=2，最后的相对量是2倍。
   5、几点注意：必须确定扩增的特异性，只有相同目标的CT值才能相减（扩增效率有可能不同），2的某次方只是理论值，实际扩增效率低于2，最好不用Syber Green。
   扩展资料：
   PCR原理：
   1、PCR技术的基本原理类似于DNA的天然复制过程，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。
   2、PCR由变性-退火-延伸三个基本反应步骤构成：
   ①模板DNA的变性：模板DNA经加热至93℃左右一定时间后，使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离，使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应作准备；
   ②模板DNA与引物的退火（复性）：模板DNA经加热变性成单链后，温度降至55℃左右，引物与模板DNA单链的互补序列配对结合；
   ③引物的延伸：DNA模板-引物结合物在72℃、DNA聚合酶（如TaqDNA聚合酶）的作用下，以dNTP为反应原料，靶序列为模板，按碱基互补配对与半保留复制原理，合成一条新的与模板DNA链互补的半保留复制链。每完成一个循环需2～4分钟，2～3小时就能将待扩目的基因扩增放大几百万倍。
   参考资料来源：
4. 答：如果有标准曲线，按照标准曲线计算。一般都是相对量。则用delta delta CT方法来计算。举例如下：
   对照组基因A的CT值为20， 内参（比如βactin)CT值15。实验组基因A CT值18，内参CT值14。
   首先算加样量：delta CT=15-14=1。2的1次方是2。也就是说实验组的加样量是对照组的2倍。
   基因A: delta CT=20-18=2。2的2次方是4。也就是说基因A的量在实验组是对照组的4倍。但是由于加样量是2倍，所以4处以2=2，最后的相对量是2倍。
   注意：
   1、必须确定扩增的特异性
   2、 只有相同目标的CT值才能相减（扩增效率有可能不同）
   3、 2的某次方只是理论值，实际扩增效率低于2
   4、 最好不用Syber Green
   扩展资料
   实时荧光定量PCR由于荧光物质的应用，可以通过光电传导系统直接探测PCR扩增过程中荧光信号的变化以获得定量结果，克服了常规PCR的许多缺点，具有如下优势：
   ①能对模板定量；
   ②封闭反应，无需PCR后处理，污染少，假阳性率低；
   ③观察和记录自动化，结果直观，避免人为判断带来的误差；
   ④工作效率高，利于实现高通量检测。
   实时荧光定量PR的缺点表现：
   ①需要特殊设备以及荧光探针，成本较高；
   ②不能显示PCR产物的片段长度；
   ③定量准确性还有待提高。
   参考资料来源：

问：什么是实时荧光定量PCR？有什么作用？请详细说明。

1. 答：好多生物工作做广告做培训噢。你怎么不去看一下。