小鼠胚胎食管和肠上皮的体视学研究

一、小鼠胚胎食管和肠上皮的体视学研究（论文文献综述）

王小寒^[1]（2016）在《第三军医大学学报2016年第38卷总目次》文中进行了进一步梳理

张肖丽^[2]（2012）在《Notch/Hes1及Wnt/β-catenin信号通路在Barrett食管发生发展中的作用》文中研究指明Barrett食管（BE）是指食管下段复层鳞状上皮被化生的单层柱状上皮所替代的一种病理现象，可伴肠化或无肠化，其中伴有特殊肠上皮化生者属于食管腺癌的癌前病变。BE是胃食管反流病最重要的并发症，是食管腺癌的癌前病变，近些年，食管腺癌的发病率逐渐增长,在西方国家的增长速度已逐为恶性肿瘤的首位，而国内随着饮食结构的变化及内镜技术的使用，Barrett食管的发生率及检出率也逐年增高，但迄今Barrett食管的发病机制尚不明确。Notch/Hes1及Wnt/β-catenin信号通路在Barrett食管发生发展中的作用非常重要，国外有学者曾研究报道Wnt/β-catenin信号通路中关键基因Wnt2在Barrett食管发生发展中有重要作用；及在Barrett食管细胞系中Notch/Hes1信号通路与胆汁酸的关系；并且有文献报道此两条通路在多种肿瘤发生发展中关系密切，但Wnt/β-catenin信号通路中关键基因Wnt1和β-catenin及Notch/Hes1信号通路在Barrett食管大鼠模型中的作用，国内外尚未见报道。目的：本研究通过构建Barrett食管的大鼠模型，采用免疫组化方法检测Barrett食管组织中Notch信号通路Notch1、Delta、Hes1和Wnt信号通路Wntl及β-catenin关键基因的表达情况，旨在探讨以上两条通路在Barrett食管发生发展过程中的作用，为本病的发生机制研究及防治提供理论依据。方法：1. SD雄性8周龄大鼠80只随机分为4个组，包括正常对照组、单纯铁剂组、食管胃十二指肠侧侧吻合术组（反流EGDA组）、食管胃十二指肠侧侧吻合术+铁剂组（反流加铁剂组），后两组行外科手术建立大鼠胃食管混合反流的模型，术后2周给单纯铁剂组和反流加铁剂组大鼠腹腔注射右旋糖酐铁注射液（30mg/kg，每周2次，共30周），术后12周各组均处死5只大鼠，术后32周处死剩余大鼠，取食管中下段行大体观察及HE染色后光镜下病理学检查。2.取得标本后，应用免疫组化的方法检测Notch1、Delta、Hes1、Wntl及β-catenin在NE、RE及BE中的表达情况。结果：1.实验中各组死亡率为:正常对照组0%、单纯铁剂组0%、反流组6.7%、反流加铁剂组10%,反流组、反流加铁剂组死亡率与对照组、单纯铁剂组相比差异有显着性（P<0.05）,反流组与反流加铁剂组相比，死亡率无明显差异（P>0.05）,术后12周，单纯铁剂组出现部分食管粘膜水肿粗糙、光镜下显示为食管粘膜慢性炎症，反流组与反流加铁剂组均出现较严重的食管粘膜损害，表现为食管粘膜充血水肿，粗糙，可见点片状溃疡及出血糜烂灶，重者出现条带状的白斑样增生；到术后32周时各组食管粘膜损伤较前更加严重，但单纯铁剂组未发生BE，反流组与反流加铁剂组BE的发生率分别为21.4%、49.1%。反流组与反流加铁剂组中BE的发生率具差异有显着性（P<0.05）；2.免疫组化指标1) Notch1及Delta在NE、RE及BE中MOD分别为0.0428±0.0316，0.1636±0.0198，0.2368±0.0251，及0.0475±0.0208，0.1462±0.0304，0.2345±0.0376，三组任意比较有显着性差异（P<0.05）。2)Hes1及Wntl在NE、RE及BE中MOD分别为0.0691±0.0265，0.1599±0.0364，0.2473±0.0329，及0.0638±0.0271，0.1517±0.0281，0.2764±0.0440，三组任意比较有显着性差异（P<0.05）。3)β-catenin在NE、RE及BE中MOD分别为0.0412±0.0334，0.1742±0.0184，0.2399±0.0304，三组任意比较有显着性差异（P<0.05）。4)Notch1与Delta及Hes1的MOD之间的相关系数分别为r=0.676,r=0.684；Wntl与β-catenin的MOD相关系数r=0.884；Notch1与β-catenin的MOD相关系数r=0.630。结论：1.应用食管胃十二指肠侧侧吻合术（即EGDA术）成功建立了胃和十二指肠内容物混合反流的动物模型，并在长期混合反流的基础上应用铁剂加重食管的损伤，更容易诱导BE的发生，证实该模型较为安全、有效，是进行BE研究中较为理想的动物模型建造方式。2.Notch及Wnt信号转导通路的关键基因在Barrett食管的异常表达明显上调，提示此两条信号通路均参与了Barrett食管的发生发展过程。

王悦^[3]（2010）在《大鵟和长耳鸮胃肠道、肝的组织学观察及相关活性物质的表达》文中认为目的观察大鵟（ Buteo hemilasius）和长耳鸮（Asio otus）胃肠道、肝的组织结构及胃肠道嗜银细胞的形态分布,检测Bax蛋白（Bcl-2 associated X protein,Bax）、转化生长因子β（β2,β3）（Transforming growth factor-β,TGF-β2 ,TGF-β3）、角质细胞生长因子（ keratinocyte growth factor,KGF）和生长素（Ghrelin）在大鵟和长耳鸮胃肠道、肝中的表达,探讨各种蛋白的生物活性作用。方法应用光镜和电镜技术观察大鵟和长耳鸮胃肠道、肝的组织结构,采用整块组织的Grimelius银染法观察大鵟和长耳鸮胃肠道嗜银细胞的分布,应用免疫组织化学方法检测Bax蛋白、TGF-β2、TGF-β3、KGF和Ghrelin在大鵟和长耳鸮胃肠道及肝中的表达,用IPP专业图像分析软件和体视学测量对其表达强度进行定量半定量分析。结果1)大鵟胃肠道的组织结构。大鵟胃可分为腺胃和肌胃两部分,光镜下胃可分为4层,从内向外依次为黏膜层、黏膜下层、肌层和外膜。腺胃腺可分为深、浅两种腺,浅层腺为单管腺,深层腺为复管泡状腺。黏膜肌层较薄,为环行平滑肌。黏膜下层由疏松结缔组织构成,其内分布有大量血管和神经。肌层较薄,由环行平滑肌构成。大肠和小肠无黏膜下层,仅由黏膜层、肌层和外膜构成,黏膜肌层较发达,黏膜肌层除回肠由内环肌和外纵肌2层构成外,肠道其它各段均为纵行肌。肌肉层由内环外纵肌构成。2)长耳鸮胃肠道的组织结构特点。胃肠道分为黏膜层、黏膜下层、肌层和外膜4层。腺胃肌肉层由内纵行和外环行2层平滑肌构成,肌胃肌肉层由内环行、中纵行、外环行3层平滑肌构成。肠绒毛有分支现象。盲肠黏膜上皮有更多的杯状细胞,固有层内淋巴细胞较少。肠段肌肉层无纵形肌,只有环形肌。3)大鵟和长耳鸮胃肠道嗜银细胞的分布。大鵟和长耳鸮腺胃和肠道各段都有嗜银细胞分布,嗜银细胞形态多样,有圆形、椭圆形、锥形、长梭形和不规则形等。腺胃的分布密度远大于肠段,从腺胃到直肠嗜银细胞的分布密度不同。4)大鵟和长耳鸮肝脏的显微结构。大鵟和长耳鸮肝脏外覆以结缔组织被膜,被膜结缔组织在肝门包绕肝动脉、门静脉和肝管,并随肝门管结构由肝门进入肝实质形成小叶间结缔组织,将肝实质分隔成许多肝小叶。小叶中央有一条中央静脉,肝细胞索、肝血窦和狄氏间隙围绕中央静脉呈放射状排列,肝细胞索、肝血窦和狄氏间隙相互交错排列,构成肝小叶的主体。5)大鵟和长耳鸮肝脏的超微结构。大鵟和长耳鸮肝细胞内富含线粒体、粗面内质网、高尔基复合体、糖原和溶酶体。线粒体内嵴结构清楚,呈板状,各嵴平行排列;粗面内质网丰富,多集中在胞核附近,膜上附有大量的核蛋白体颗粒;高尔基复合体由1～2层扁平囊泡和周围的小泡组成,多位于胞核与胆小管之间;胆小管是由相邻肝细胞连接面之间局部胞质及膜凹陷形成的管腔窄小的结构。6)大鵟胃肠道内相关活性物质的表达。大鵟胃肠道呈Bax、KGF、TGF-β2、TGF-β3免疫反应阳性。Bax蛋白主要分布于胃黏膜单层柱状上皮细胞,腺胃深腺单层立方上皮细胞的胞膜、胞质及固有层平滑肌纤维,肠黏膜和肠腺的单层柱状上皮细胞胞膜、胞质内及固有层内。KGF阳性物质分布于腺胃浅层单管腺、深层复管状腺和黏膜的上皮细胞膜,肌胃黏膜上皮和固有层单管腺上皮的细胞膜,肠道固有层的血管、淋巴和平滑肌纤维。TGF-β2和TGF-β3主要集中于浅层单管腺上皮细胞、深层复管状腺上皮细胞和黏膜上皮细胞胞质,肌胃黏膜上皮及固有层单管腺细胞胞质,肠黏膜上皮细胞和肠腺上皮细胞的细胞质。大鵟腺胃和肌胃呈Ghrelin免疫反应阴性,十二指肠、空肠、回肠、盲肠和直肠的黏膜层呈Ghrelin免疫反应阳性,阳性细胞分布于黏膜上皮、肠腺上皮和固有层。7)长耳鸮胃肠道内相关活性物质的表达。长耳鸮胃肠道呈Bax、TGF-β2、TGF-β3免疫反应阳性,Bax蛋白主要分布于胃黏膜单层柱状上皮细胞、腺胃深腺单层立方上皮细胞的胞膜、胞质及固有层平滑肌纤维,肠黏膜和肠腺的单层柱状上皮细胞胞膜及胞质。TGF-β2和TGF-β3主要集中于深腺单层立方上皮细胞及黏膜单层柱状上皮细胞胞质,肌胃黏膜单层柱状上皮细胞及固有层单管腺单层柱状上皮细胞胞质内,肠黏膜、肠腺的单层柱状细胞胞质及黏膜固有层内。Ghrelin主要定位于胃腺单层立方上皮细胞,肠黏膜、肠腺的单层柱状上皮细胞和固有层。8)TGF-β2和Bax在大鵟和长耳鸮肝内的表达。大鵟和长耳鸮肝呈TGF-β2和Bax免疫反应阳性,阳性细胞呈棕色或棕褐色,棕色颗粒分布在细胞质内,肝细胞呈TGF-β2免疫反应阳性,阳性细胞分布在肝细胞胞质和内皮细胞。Bax蛋白阳性细胞分布在肝细胞胞质和门管区中央静脉和动脉,门管区的阳性表达明显强于肝细胞。结论1)大鵟胃肠道的组织结构与其他鸟类基本相似,与长耳鸮相比,大鵟绒毛无分支、无中央乳糜管,二者肌肉层的排列方式也不同。2)大鵟与长耳鸮胃肠道嗜银细胞的分布密度不同,可能与生活环境、食物成分、取食方式、排遗活动以及消化作用等多种因素有关。胃肠道内分泌细胞可能具有内分泌、腔分泌和旁分泌3种分泌方式,且以内分泌和腔分泌为主要方式。3)长耳鴞的肝小叶较大鵟易区分,肝细胞排列比大鵟更规则。大鵟肝细胞内粗面内质网、高尔基复合体、线粒体、溶酶体数目及胆小管面的微绒毛数量均比长耳鴞多,提示大鵟肝细胞比长耳鴞的活跃。4)Bax蛋白在大鵟和长耳鸮胃肠道内均有表达,提示Bax参与胃肠细胞的凋亡,可能是禁食对胃肠黏膜的损伤使得细胞得不到充分的营养供给,发生了凋亡,以此来维持黏膜的正常结构。大鵟和长耳鸮胃部Bax阳性表达的面密度值明显大于小肠,说明禁食对胃的损伤比小肠严重。5)大鵟和长耳鸮胃肠道各段均有TGF-β2和TGF-β3免疫阳性物质分布,且在肠内的表达强弱不完全一致,表明它们在胃肠道不同部位所起的调控作用有差异。推测TGF-β2与TGF-β3参与了黏膜的损伤后修复。6)大鵟和长耳鸮肌胃内未发现Ghrelin免疫阳性细胞分布,可能是禁食使大鵟和长耳鸮肌胃内Ghrelin的分泌量减少的原因。从十二指肠到盲肠Ghrelin阳性表达的面密度值呈递减趋势,提示随着消化能力的减弱,Ghrelin在肠道内的表达减弱,表明Ghrelin可能参与鸟类胃肠功能的调节,其分泌量与消化能力相关。7)TGF-β2在内皮细胞的表达比肝细胞强,原因可能是饥饿使肝细胞受损,导致TGF-β2表达,从而抑制内皮细胞生长。大鵟肝内TGF-β2阳性细胞的面密度值大于长耳鸮,可能是因为禁食对大鵟肝的损伤程度较大,导致TGF-β2的表达较多。Bax蛋白阳性细胞分布在肝细胞和门管区,提示禁食对肝脏的损伤作用导致细胞凋亡。

刘登群^[4]（2009）在《骨髓来源细胞在体内的多向分化潜能及其向小肠上皮细胞分化机制研究》文中指出干细胞是存在于胚胎发育阶段和成熟个体不同组织内具有自我更新和分化潜能的一类细胞。目前主要研究两大类干细胞,其一是胚胎干细胞,其二是成体干细胞。胚胎干细胞由于其培养成本较高,且涉及伦理问题因素,使得其在组织工程领域的研究受到一定程度的限制。而成体干细胞可以从成熟个体的多种组织中分离得到,且体外扩增较为方便,因而受到很多学者的青睐。骨髓是机体最主要的造血组织,同时其又蕴含有多种类型的干细胞,因而也是机体内最大的成体干细胞库。骨髓来源细胞（bone marrow derived cells, BMDCs）中主要包含两种类型的干细胞,即造血干细胞（hematopoietic stem cells, HSC）和间充质干细胞（mesenchymal stem cells, MSC）。干细胞的迁移、增殖、分化过程受到组织微环境中多种细胞成份和体液成份的联合调控。充分认识干细胞的多向分化潜能和机制有助于更加深刻认识个体发育、组织再生以及肿瘤发生等诸多生命过程,为利用干细胞的分化潜能和分泌能力促进各种创伤的修复和疾病的临床治疗提供重要的理论和实验依据。然而目前国内外不同的研究小组对于BMDCs的分化潜能仍持有不同观点,考虑到很多已观察到的分化现象都是利用体外诱导手段,在体内能否真正实现相应的分化表型还有待证实,因此进一步系统地探讨骨髓来源细胞在体内的多向分化潜能和分化机制仍然是干细胞研究的一个重要方向。胃肠道是人体进行食物消化、营养吸收和免疫反应的重要器官,同时和这些功能相适应,胃肠道上皮组织又是人体内增殖能力最为旺盛、更新速度最快的组织之一。胃肠道上皮细胞的快速更新得益于肠道干细胞的不断复制和分裂。骨髓来源细胞进入肠道后会对肠道微环境产生什么影响?其是否能够分化为肠上皮细胞?是否会影响胃肠道运动功能?国外学者曾报道在接受骨髓移植的临床患者和实验动物胃肠道内,都能够发现骨髓来源细胞分化为受体的肠上皮细胞。这既是对骨髓来源细胞分化潜能的一个新认识,同时也是对肠上皮细胞起源认识的一个新补充。然而骨髓来源细胞在肠道内的很多生物学特点还没有明确,例如迁移路径、分化潜能、细胞起源、上皮分化机制等等。在本课题中,我们首先使用全身电离辐射对C57BL/6小鼠造成全身多组织多脏器损伤,随后利用GFP小鼠通过骨髓移植建立骨髓嵌合小鼠动物模型,在嵌合鼠体内分析BMDCs的多向分化潜能。最后选定肠道作为研究对象,探讨BMDCs对辐射损伤肠道Cajal细胞（Interstitial cells of Cajal, ICC）的修复作用,并重点研究BMDCs能否分化为肠上皮细胞及调控其分化过程的具体机制。我们的工作为深入研究BMDCs在肠道内的分化潜能、分化机制,以及肠上皮更新动力学提供了新的理论指导和实验依据。本研究主要包括四部分内容：一、GFP-C57BL/6骨髓嵌合小鼠的建立及评价复制骨髓嵌合小鼠模型前首先对使用的GFP转基因小鼠进行评价,然后使用不同照射剂量对C57BL/6小鼠进行全身照射,评估移植组和对照组之间外周血白细胞变化和照射后14天存活率,确定最佳照射剂量。测定长期嵌合情况下,嵌合鼠骨髓细胞的嵌合比例,即骨髓单个核细胞、造血干细胞、以及间充质干细胞中GFP阳性细胞所占比例。二、骨髓来源细胞在体内的多向分化潜能研究分析移植后不同时间供体BMDCs对骨髓和脾脏这两个造血器官的重建作用,并通过免疫荧光双标分析BMDCs向不同胚层组织细胞的分化潜能,包括：（1）中胚层：骨髓细胞、脾细胞、肾小球血管系膜细胞；（2）内胚层：肺泡上皮细胞、肝细胞；（3）外胚层：神经元、皮肤毛囊细胞和表皮细胞。三、骨髓来源细胞对肠道ICC放射损伤的修复作用研究分析电离辐射对肠道Cajal细胞（Interstitial cells of Cajal, ICC）的损伤效应,移植的GFP小鼠BMDCs能否在肠道肌层内分化为ICC及其他细胞。四、骨髓来源细胞转分化为肠上皮细胞的现象及机制研究首先探讨BMDCs能否在肠道内分化为肠上皮细胞；第二分析损伤肠道中趋化因子SDF-1的表达变化及辐照后肠上皮细胞对BMDCs的趋化作用和BMDCs在肠道内的迁移途径,第三探讨BMDCs在体内转分化为肠上皮细胞的可能机制、具体哪一类骨髓干细胞能够分化为肠上皮细胞、MSC是如何获取肠上皮细胞表型的。本课题取得以下主要实验结果和结论：1.10Gy照射后移植BMDCs能够建立长期稳定的GFP-C57BL/6骨髓嵌合小鼠对小鼠进行10Gy全身照射并经尾静脉输入1.5×107个GFP小鼠BMDCs,移植后14天时受体小鼠的存活率可以达到93%以上,且外周血白细胞水平基本恢复至正常水平。嵌合小鼠可以长期存活,但毛发逐渐白化。移植后14个月受体骨髓GFP阳性率可到90%以上。其中HSC和MSC的GFP阳性率分别为99.95%和96.84%。2.首次全身性系统性观察了BMDCs在体内的多向分化潜能10Gy全身照射可导致全身多组织多脏器辐射损伤,BMDCs可参与各种辐射敏感和相对不敏感组织的损伤修复过程。移植早期BMDCs向不同脏器定植能力的差异主要取决于各脏器的辐射敏感性及损伤程度。BMDCs最先出现于骨髓和脾脏并重建造血功能,随后其他脏器内供体细胞数量开始增多。BMDCs可在体内分化为骨髓和脾脏的各种血细胞、肾小球血管细胞和肾小管上皮细胞、肺泡上皮细胞、肝细胞和卵圆细胞、神经元、皮肤毛囊细胞和表皮细胞等细胞类型。其主要是通过移植后早期定植的BMDCs在微环境因素诱导下分化而来的。结果表明BMDCs除具有向中胚层起源细胞分化的能力以外,还具有跨胚层分化潜能。3.电离辐射对肠道Cajal细胞具有损伤效应Cajal细胞可以产生慢波电位,是胃肠道蠕动的起搏细胞。不同剂量的电离辐射可引起该细胞密度显着下降,使得其细胞突起明显减少,所形成的细胞网络变得稀疏,并可以引起其标志物和重要功能分子c-Kit表达水平显着下降。其细胞数量减少和受照剂量在一定范围内呈线性相关。10Gy照射后3dICC密度可减少53.4%、c-Kit表达水平减少74.5%。我们首次发现电离辐射可引起ICC损伤,这一发现可从细胞机制上解释为何电离辐射后的患者和实验动物容易出现肠梗阻和肠套叠等临床表现。4.首次发现BMDCs能够分化为肠壁肌层中Cajal细胞和巨噬细胞Cajal细胞（ICC）对各种损伤因素都非常敏感,因此探讨损伤后ICC的细胞补充来源非常重要。发育学研究表明ICC不是起源于神经外胚层,而是起源于间叶组织,在新生个体消化道内某些特殊表型的平滑肌细胞可能是ICC的祖细胞。通过研究我们首次发现移植后小鼠肠道内BMDCs能够分化为ICC,骨髓移植后0%-11.2%的ICC可呈GFP和c-Kit双阳性。这是对BMDCs分化潜能的新认识,同时也为ICC起源研究提供了新的线索。5. BMDCs可在受体小肠内自发的连续的分化为小肠上皮细胞。位于肠上皮层当中的BMDCs可以表达肠上皮细胞标志物广谱细胞胶蛋白（PCK）,而不表达血系细胞标志物CD45,表明其能够分化为肠上皮细胞。上皮层内少量BMDCs可以表达神经细胞标志物Chromogranin A,表明其可分化为肠神经内分泌上皮细胞并影响肠道内分泌功能。免疫电镜证实上皮内供体来源细胞具有正常肠上皮细胞的超微结构特点。图像分析和流式细胞计数表明供体来源肠上皮细胞约占全部上皮细胞的9.41%-16.07%。6.电离辐射损伤后的肠道可以趋化BMDCs向肠道内迁移定植SDF-1/CXCR4是目前发现的最重要的趋化效应作用轴。受照后6h起,肠道中SDF-1的mRNA水平就显着增加,至24h增加约6倍；SDF-1的蛋白表达增加可维持到受照后8d,提示辐照损伤后肠道除了依靠自身干细胞进行损伤修复以外,还可在一定时期内通过趋化BMDCs促进损伤修复。骨髓间充质干细胞表达SDF-1的受体CXCR4,可对损伤后肠上皮增加的SDF-1做出趋化反应。10Gy照射后的肠上皮细胞株IEC-6对BMDCs具有显着的趋化作用,SDF-1的拮抗剂AMD3100可以部分阻断该效应。趋化3h后受照IEC-6对于MSC的趋化作用较对照组增加43.8%,而对HSC的趋化作用仅增加15.1%,提示损伤的肠上皮对MSC具有更强的趋化作用,应进一步研究MSC在损伤肠道中的作用。移植早期BMDCs首先进入肠道固有层,并由底部向顶部逐渐迁移,不会进入肠上皮层。移植后1个月左右,BMDCs可完成对固有层的填充并开始分化为肠上皮细胞。7.细胞融合并非BMDCs形成骨髓来源肠上皮细胞的唯一机制使用雌性GFP小鼠骨髓移植给雄性C57小鼠,将GFP阳性作为供体细胞标志物,将Y染色体荧光原位杂交（Y-FISH）阳性作为受体细胞标志物。通过连续切片进行GFP和Y-FISH的共表达分析,我们发现GFP和Y-FISH双阳性的供体来源上皮细胞占全部骨髓来源上皮细胞的53.6%,而GFP单阳性的细胞占46.4%,两者之间相差不具显着性,说明细胞融合不是BMDCs形成肠上皮细胞的唯一机制。8.间质上皮转化（MET）是BMDCs形成肠上皮细胞的另一种机制供体骨髓来源肠上皮细胞主要分布于隐窝绒毛轴的绒毛部分,且呈散在不连续的分布状态,隐窝结构中很少观察到骨髓来源上皮细胞。增殖细胞核标记物Ki67阳性的BMDCs可以进入绒毛上皮当中,细胞多为圆形,位于上皮层的底部,少量位于上皮层上部。上皮层内约有23.6%的BMDCs为Ki67阳性,且存在有Ki67阳性的肠上皮细胞位于绒毛区内。这些结果说明增殖性BMDCs可以从间质内进入肠上皮当中,并在局部微环境的诱导下获取肠上皮细胞的形态和表型。9.MSC较HSC更容易诱导并呈现出肠上皮细胞表型将MSC和HSC分别加入到肠上皮细胞株IEC-6当中进行共培养,发现MSC在24小时即可检测到上皮细胞特异性粘附分子E-Cadherin的表达,共培养48hMSC呈细胞角蛋白PCK染色阳性；而HSC在共培养7d后E-Cadherin和PCK才呈阳性表达,提示MSC较HSC更容易分化为肠上皮细胞。10.MSC细胞可能通过间质上皮转化形成肠上皮细胞分离胎儿的骨髓进行原代培养,通过细胞形态、表面标记、细胞周期和诱导分化证实传代至第10代的细胞具有良好的MSC细胞特性。使用胎儿骨髓MSC和肠上皮细胞株IEC-6进行共培养,发现肠上皮细胞能够促进hMSC增殖。正常hMSC不表达E-Cadherin,共培养3d后E-Cadhein表达水平增加6.46倍,7d后E-Cadherin增加7.66倍；而肠上皮特异性细胞角蛋白Krt20在共培养3d时表达增加3.77倍,7d时增加6.38倍。这些结果提示共培养时hMSC可能是通过高表达E-Cadherin来启动间质上皮转化过程,进而逐渐表达Krt20使得hMSC获取肠上皮细胞表型。

徐小冬,俞利平,尹洪萍,陈小囡,陈辉^[5]（2009）在《神经肽Y在小鼠胃发育中的表达及变化》文中研究说明目的:观察神经肽Y（neuropeptide Y,NPY）在小鼠胚胎胃内的表达,分布及发育规律,探讨胃组织形态的变化、功能与NPY的关系.方法:采用HE染色法和免疫组化SABC法,免疫组化图像分析系统对切片进行定量测定,研究小鼠胚胎13D（embryonic days,E13D）至出生前（E21D）胃NPY的表达情况.结果:首先于胚胎14d的肌间处及黏膜上皮出现NPY免疫反应物阳性表达,随发育相继出现在黏膜下层,固有层及黏膜肌层内,在鼠胎胃发育的E14D-E18D,免疫物反应阳性由弱到强,E18D到高峰.NPY在胃壁的总数密度E15D时明显增加,E15D组与E14D组间有差异（2.26±4.19vs1.05±3.91,P<0.05）;总面密度E18D时明显增加,与其之前的E14-16D及随后的E19D-21D差异具有显着性（9.00±3.41vs1.12±1.10,1.88±4.75,3.77±5.09,3.39±3.11,3.36±4.11,3.43±3.16,P<0.01）;黏膜阳性表达密度E18D较其他组显着升高（7.35±5.01vs2.45±2.79,3.41±3.25,5.89±7.43,3.55±3.78,4.33±6.52,3.21±6.25,2.77±6.13,P<0.05或0.01）.结论:E14D-E18D是鼠NPY在胎鼠胃发生发育的一个关键时期;NPY发生发育与胃发育及功能的建立有着密切关系.

林雪梅,张海英,姜蓉,汪维伟^[6]（2007）在《低剂量甲基汞促进鼠胚肠上皮细胞凋亡及相关机制的体内实验》文中指出目的探讨低剂量氯化甲基汞（methyl-mercury chloride,MMC）对小鼠胚胎肠上皮细胞凋亡的影响及相关机制。方法给E12.5d、E13.5d孕鼠一次性腹腔注射MMC液（0、1、2、4mg/kg）,48h后取十二指肠、结肠。所获标本均制成石蜡切片,部分经HE染色,体视学法计数肠上皮凋亡小体;其余切片用于免疫组化染色,半定量分析凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax及即刻早期基因c-fos的表达。结果①各实验组凋亡小体数均高于对照组（P<0.05）,与MMC剂量呈正相关（P<0.01）。②Bcl-2在各组上皮中的表达均低于对照组（P<0.05）,与MMC的剂量呈负相关（P<0.01）;而Bax及c-fos的表达均强于对照组（P<0.05）,与MMC的剂量呈正相关（P<0.01）。结论低剂量MMC在体内可促进胎鼠肠上皮细胞凋亡,可能是一种通过下调Bcl-2表达,上调Bax及c-fos表达的机制。

林雪梅,汪维伟,李芳菲^[7]（2007）在《胎鼠胃上皮细胞增殖、凋亡与胃形态发生的关系》文中研究表明目的研究胎鼠胃上皮细胞增殖、凋亡的时空规律及其与胃形态发生的关系。方法每间隔0.5 d取E1115.5 d小鼠整胎,横断连续切片,观察胃形态发生,体视学法测量胃贲门、幽门、大弯、小弯上皮分裂细胞密度（DMC）、凋亡小体密度（DAB）。结果①E11.5 d胃开始发育,E12 d胃底膨出,胃大、小弯出现。②上皮细胞DMC峰值均在DAB峰值之前。③贲门处DMC无明显峰值,DAB峰值在E11.5、12.5、13.5 d;幽门处DMC峰值在E12.5 d,DAB峰值在E14 d;大弯DMC峰值在E11.5、12 d时,DAB值持续较低;小弯DMC峰值在E11.5 d,DAB峰值在E12.5 d。结论胎鼠胃上皮细胞的增殖及凋亡与胃发生有密切的时空关系。

周艳华^[8]（2006）在《运动对大鼠食管形态学的影响》文中研究指明探讨有关负重式游泳训练对大鼠食管形态学方面的影响,为运动对消化系统提供形态学方面的依据。采用石蜡切片法,制作食管的石蜡切片。结果表明,运动组比对照组食管壁厚度明显增加,其中肌层和外膜尤为明显。长期训练对哺乳动物的消化系统可能产生良好的影响,提高消化系统对食物的消化和吸收能力。

汪维伟,李均,王正义^[9]（2005）在《小鼠胚胎食管和肠上皮细胞增殖与凋亡》文中研究表明目的:研究小鼠胚胎食管和肠上皮细胞的增殖与凋亡。方法:体视学方法观测E1117dICR胎鼠食管、十二指肠和结肠上皮的增殖与凋亡,免疫组化法显示Bcl2、P53、Bax在三段消化管上皮中的表达。结果:三段消化管的上皮细胞密度与凋亡小体密度和分裂细胞密度间未见一致的相关性。凋亡小体分布食管上皮各层,而肠上皮中主要在游离面。Bcl2和p53在食管、小肠、结肠上皮细胞中表达峰值分别在E11d～13d和E11d～14d,Bax的表达峰值分别为E11d、E14d、E15d。结论:上皮细胞密度对上皮细胞分裂和凋亡的影响不明显。食管和肠上皮中凋亡小体分布的不同可能与形态发生方式不同有关。Bax和Bcl2可能分别具有促进和抑制肠上皮细胞凋亡的作用;p53与上皮细胞凋亡的关系不密切。

张海英,林雪梅,汪维伟^[10]（2005）在《氢化可的松对小鼠胚胎肠上皮凋亡的影响》文中进行了进一步梳理目的观察氢化可的松（hydrocortisone,HC）对胎鼠肠上皮细胞凋亡及凋亡相关蛋白表达的影响。方法分别取E13.5d、E14.5d胎鼠的十二指肠及结肠段,体外组织培养,实验各组分别加入HC液（0μg/ml,0.5μg/ml,1.0μg/ml,2.0μg/ml）,培养24h后取出标本,制成石蜡切片。部分切片经HE染色,体视学法观测胎鼠肠上皮中的凋亡小体数;余切片经免疫组化染色,观察凋亡相关蛋白Bcl-2,Bax,P53及c-Fos的表达。结果①各实验组胎鼠肠上皮凋亡小体数均较对照组高,P<0.05,与HC剂量呈正相关,P<0.01。②各实验组胎鼠肠上皮细胞表达的Bcl-2均较对照组低,P<0.05,与HC的剂量呈负相关,P<0.01;而Bax及c-Fos的表达则高于对照组,P<0.05,与HC剂量均呈正相关,P<0.01;P53的表达差异无统计学意义。结论HC在体外可促进胎鼠肠上皮细胞凋亡,可能是一种通过下调Bcl-2表达,上调Bax及c-Fos表达的P53非依赖机制。

二、小鼠胚胎食管和肠上皮的体视学研究（论文开题报告）

（1）论文研究背景及目的

此处内容要求：

首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。

写法范例：

本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。

（2）本文研究方法

调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。

观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。

实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。

文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。

实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。

定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。

定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。

跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。

功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。

模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。

三、小鼠胚胎食管和肠上皮的体视学研究（论文提纲范文）

（2）Notch/Hes1及Wnt/β-catenin信号通路在Barrett食管发生发展中的作用（论文提纲范文）

（3）大鵟和长耳鸮胃肠道、肝的组织学观察及相关活性物质的表达（论文提纲范文）

（4）骨髓来源细胞在体内的多向分化潜能及其向小肠上皮细胞分化机制研究（论文提纲范文）

（5）神经肽Y在小鼠胃发育中的表达及变化（论文提纲范文）

（7）胎鼠胃上皮细胞增殖、凋亡与胃形态发生的关系（论文提纲范文）

（8）运动对大鼠食管形态学的影响（论文提纲范文）

四、小鼠胚胎食管和肠上皮的体视学研究（论文参考文献）

• [1]第三军医大学学报2016年第38卷总目次[J]. 王小寒. 第三军医大学学报, 2016(24)
• [2]Notch/Hes1及Wnt/β-catenin信号通路在Barrett食管发生发展中的作用[D]. 张肖丽. 河北医科大学, 2012(12)
• [3]大鵟和长耳鸮胃肠道、肝的组织学观察及相关活性物质的表达[D]. 王悦. 西北师范大学, 2010(05)
• [4]骨髓来源细胞在体内的多向分化潜能及其向小肠上皮细胞分化机制研究[D]. 刘登群. 第三军医大学, 2009(05)
• [5]神经肽Y在小鼠胃发育中的表达及变化[J]. 徐小冬,俞利平,尹洪萍,陈小囡,陈辉. 世界华人消化杂志, 2009(02)
• [6]低剂量甲基汞促进鼠胚肠上皮细胞凋亡及相关机制的体内实验[J]. 林雪梅,张海英,姜蓉,汪维伟. 第三军医大学学报, 2007(05)
• [7]胎鼠胃上皮细胞增殖、凋亡与胃形态发生的关系[J]. 林雪梅,汪维伟,李芳菲. 第三军医大学学报, 2007(01)
• [8]运动对大鼠食管形态学的影响[J]. 周艳华. 山西农业大学学报(自然科学版), 2006(02)
• [9]小鼠胚胎食管和肠上皮细胞增殖与凋亡[J]. 汪维伟,李均,王正义. 解剖学杂志, 2005(02)
• [10]氢化可的松对小鼠胚胎肠上皮凋亡的影响[J]. 张海英,林雪梅,汪维伟. 重庆医科大学学报, 2005(01)

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