一、重组E.coli L-天冬酰胺酶在大鼠中的药物代谢动力学(英文)（论文文献综述）
郑梦园,荣若男,邱明丰,苏靖[1]（2021）在《以红细胞为载体的治疗性酶递送系统》文中研究指明治疗性酶是一类具有药效的酶,随着生物技术的发展被广泛应用于疾病的治疗中。酶对底物具有很高的亲和力和特异性,而且能催化多种目标分子转化为所需产物,这2种特性使得酶可作为一种特殊药物进行治疗性生物化学反应。然而,治疗性酶的代谢和临床疗效往往受到多种因素的限制,如存在体内稳定性和免疫原性较差、过敏反应以及药物诱导的抗体灭活等缺点。近年来,新载体和新技术在优化治疗性酶方面取得了一定进展,特别是红细胞负载治疗性酶已被广泛研究。本文综述了红细胞负载的酶在不同疾病治疗过程中的相关临床前/临床研究,期望为红细胞负载治疗性酶的进一步转化应用提供一定参考。
李肖[2]（2021）在《柴胡—白芍药对及其成分配伍增效抗抑郁作用与协同机制研究》文中进行了进一步梳理背景:中药复方具有组方复杂（君、臣、佐、使）和作用规律多样（相须、相使、相恶）的特点,疗效确切且无严重副作用,体现了中药的治疗优势。但是怎样阐释中药配伍的科学内涵,用科学界的通用语言表征清楚中药配伍的合理性,却是一个重大的挑战。药对,是中医理论指导下固定的两味或三味药物组合。相比于大复方,药对药味简化,易于阐明药效物质与作用机制。药对本身即为小复方,可反映复方配伍的特殊规律与内在联系,因此常作为中药复方配伍规律研究的对象。柴胡-白芍系多个疏肝解郁名方逍遥散、柴胡疏肝散、四逆散等的基础药物。柴胡辛散,疏肝解郁;白芍酸收,养血柔肝,二者散收相合,构成调畅情志复方的核心药对。现代药理研究表明,该药对抗抑郁作用确切。然而,柴胡-白芍药对配伍是否具有增效抗抑郁作用?其增效抗抑郁作用的协同机制是什么?柴胡-白芍药对抗抑郁成分有哪些?其关键成分配伍是否具有协同抗抑郁作用?其协同抗抑郁作用机制又是什么?这些问题尚不清楚。目的:（1）明确柴胡-白芍药对是否具有配伍增效抗抑郁作用;系统阐明柴胡-白芍药对配伍增效抗抑郁作用的协同机制。（2）筛选柴胡-白芍药对关键抗抑郁成分,明确该药对关键成分配伍是否具有协同抗抑郁作用;系统阐明该药对关键成分配伍协同抗抑郁机制。方法:（1）采用网络药理学方法,预测柴胡-白芍药对抗抑郁成分、抗抑郁靶点、抗抑郁通路。构建成分-靶点-通路网络,揭示柴胡、白芍共同调节的靶点和通路,以及独立调节的靶点和通路。从网络药理学角度,阐明柴胡-白芍药对配伍抗抑郁作用的协同机制。另外,通过成分贡献指数分析,筛选柴胡-白芍药对关键抗抑郁成分。（2）采用慢性不可预知应激抑郁大鼠模型,以大鼠体重和行为学（糖水偏好、旷场穿越格数、强迫游泳不动时间）为指标,评价并比较柴胡、白芍与柴胡-白芍药对分别在低、高同等给药剂量下对大鼠抑郁症状的改善作用,明确柴胡-白芍药对配伍增效抗抑郁作用。以血浆、外周血单个核细胞（PBMCs）、海马为样本,采用LC-MS代谢组学分析技术,发现柴胡、白芍及柴胡-白芍药对调节的差异代谢物和代谢通路;揭示柴胡、白芍所共同调节的差异代谢物和代谢通路,以及独立调节的差异代谢物和代谢通路,从代谢组学角度阐明柴胡-白芍药对配伍增效抗抑郁作用的协同机制。通过关联分析网络药理学和代谢组学结果,并结合代谢通路所含差异代谢物数量,筛选主要代谢通路。采用蛋白免疫印迹和酶联免疫吸附技术对主要代谢通路及其相关信号通路进行验证,明确柴胡-白芍药对发挥配伍增效抗抑郁作用的关键协同机制。（3）采用皮质酮损伤PC12细胞模型,以细胞存活率为指标,对网络药理学所预测柴胡-白芍抗抑郁成分进行抗抑郁活性筛选,结合网络药理学结果,筛选柴胡-白芍药对关键抗抑郁成分。采用Chou-Talalay,Loewe和HAS三种协同作用评价数学模型,明确关键成分配伍的协同抗抑郁作用。以PC12细胞为样本,采用LC-MS代谢组学分析技术,发现单用成分及配伍成分调节的差异代谢物和代谢通路;揭示两成分所共同调节的差异代谢物和代谢通路,以及独立调节的差异代谢物和代谢通路,从代谢组学角度阐明成分配伍协同抗抑郁作用机制。通过关联分析网络药理学和代谢组学结果,并结合代谢通路所含差异代谢物数量,筛选主要代谢通路。采用蛋白免疫印迹和酶联免疫吸附技术对主要代谢通路及其相关信号通路进行验证,明确成分配伍发挥协同抗抑郁作用的关键协同机制。结果:（1）网络药理学预测结果显示:柴胡抗抑郁成分有19种,调节抑郁靶点179个、通路20条;白芍抗抑郁成分有11种,调节抑郁靶点155个、通路20条。成分-靶点-通路网络拓扑分析结果显示:柴胡和白芍共同调节靶点135个、通路17条;柴胡独立调节靶点44个、通路3条;白芍独立调节靶点20个、通路3条,体现了柴胡-白芍药对配伍多成分-多靶点-多通路抗抑郁作用的协同机制特点。另外,成分贡献指数筛选结果显示:柴胡关键抗抑郁成分3种（柴胡皂苷A、槲皮素、异鼠李素）、白芍关键抗抑郁成分2种（芍药苷、芍药内酯苷）。（2）抑郁大鼠模型抗抑郁作用评价结果显示:在低、高同等给药剂量下7.5g/kg、15 g/kg柴胡-白芍药对均具有配伍增效抗抑郁作用。代谢组学结果显示:血浆中,柴胡调节差异代谢物10个、代谢通路4条,白芍调节差异代谢物9个、代谢通路4条,配伍后调节差异代谢物14个、代谢通路5条;PBMCs中,柴胡调节差异代谢物8个、代谢通路条6,白芍调节差异代谢物9个、代谢通路5条,配伍后调节差异代谢物11个、代谢通路8条;海马中,柴胡调节差异代谢物12个、代谢通路6条,白芍调节差异代谢物10个、代谢通路9条,配伍后调节差异代谢物16个、代谢通路11条。在三个样本中,药对配伍后调节差异代谢物及代谢通路数量均多于单用药。主要代谢通路筛选结果显示:调节花生四烯酸代谢、色氨酸代谢、嘌呤代谢为柴胡-白芍药对配伍增效抗抑郁作用的主要协同机制。实验验证结果显示:调节花生四烯酸代谢、嘌呤代代谢、MAPK/NF-κB/NLRP3信号通路是柴胡-白芍药对发挥增效抗抑郁作用的关键协同机制。（3）细胞模型抗抑郁作用评价结果显示:柴胡皂苷A、芍药内酯苷分别为柴胡、白芍关键抗抑郁活性成分。协同作用评价结果显示:2.5μmol/L柴胡皂苷A、25μmol/L芍药内酯苷配伍具有最佳协同抗抑郁作用;1.25-2.5μmol/L柴胡皂苷A、12.5-25μmol/L芍药内酯苷配伍是具有协同抗抑郁作用的剂量范围。代谢组学结果显示:柴胡皂苷A调节差异代谢物12个、代谢通路3条,芍药内酯苷调节差异代谢物10个、代谢通路5条,配伍后调节差异代谢物个16、代谢通路7条。成分配伍后调节差异代谢物及代谢通路数量均多于单用药。主要代谢通路筛选结果显示:调节色氨酸代谢、嘌呤代谢、TCA循环、谷氨酸代谢为柴胡皂苷A-芍药内酯苷成分配伍协同抗抑郁作用的主要协同机制;实验验证结果显示:调节色氨酸代谢、TCA循环、嘌呤代谢、谷氨酸代谢、MAPK/NF-κB/NLRP3号通路是柴胡皂苷A-芍药内酯苷成分配伍发挥协同抗抑郁作用的关键协同机制。结论:（1）柴胡-白芍药对及其关键抗抑郁成分柴胡皂苷A-芍药内酯苷确有配伍增效抗抑郁作用。（2）柴胡-白芍药对及其关键抗抑郁成分柴胡皂苷A-芍药内酯苷配伍具有多成分-多靶点-多通路配伍增效抗抑郁作用的协同机制,其关键协同机制为调节色氨酸代谢、TCA循环、谷氨酸代谢、嘌呤代谢、MAPK/NF-κB/NLRP3信号通路。
李一帆[3]（2021）在《小菜蛾解毒酶对4类化合物的作用机理研究》文中研究表明小菜蛾Plutella xylostella（L.）是十字花科作物的重要害虫,具有分布广、世代短、繁殖快、抗药性发展迅速等特点,给蔬菜生产造成了巨额的经济损失。由于化学杀虫剂的不合理使用,导致小菜蛾对目前市面上所有类型的杀虫剂都产生了不同程度的抗药性,所以探究小菜蛾对杀虫剂的抗药性机理迫在眉睫。解毒酶介导的代谢抗性在小菜蛾对杀虫剂的抗药性机理中尤为重要,但小菜蛾解毒酶对很多杀虫剂解毒代谢的分子机制尚不明确。因此,研究小菜蛾解毒酶的作用机理对解决小菜蛾的抗药性问题具有重要科学价值和应用前景。本研究通过解毒酶活性分析的方法,研究了小菜蛾解毒酶对斑蝥素的解毒代谢功能;采用分子生物学实验和计算机分子模拟结合的手段研究了小菜蛾谷胱甘肽-S-转移酶（PxGSTs）对唑虫酰胺（TFP）解毒代谢的分子机理;联合使用同源模建、分子动力学（MD）模拟、单残基能量分解、计算丙氨酸扫描（CAS）等方法,以谷胱甘肽-S-转移酶（GST）抑制剂——S-己基谷胱甘肽（GTX）为分子探针分析了PxGSTs与化合物的相互作用方式以及结合的关键氨基酸;通过蛋白质三维结构模建、分子对接、分子动力学模拟等技术联合分子生物学实验,阐明了小菜蛾羧酸酯酶（PxEst-6）代谢4种拟除虫菊酯（联苯菊酯,氟氯氰菊酯,氯氰菊酯和λ-氯氟氰菊酯）的分子机理。主要研究结果如下:1.小菜蛾解毒酶系对斑蝥素的解毒代谢目前关于小菜蛾对生物源杀虫剂的解毒代谢已有大量的报道,但是相关研究还未涉及小菜蛾对斑蝥素的解毒代谢。我们通过对小菜蛾解毒酶系（谷胱甘肽-S-转移酶,羧酸酯酶和细胞色素P450酶）和PSPs酶系活性的测定,发现亚致死剂量的斑蝥素处理后小菜蛾体内PSPs的活性呈现出随时间先降低后逐步恢复的趋势;而小菜蛾体内解毒酶系的活性呈现出先降低后升高的趋势（P450酶活性的升高最为显着）,且解毒酶系活性升高的趋势与PSPs酶系活性恢复的趋势相同。该结果表明小菜蛾解毒酶能够在体内对斑蝥素解毒代谢,并使PSPs被抑制的活性逐渐恢复,该研究结果填补了小菜蛾解毒酶系对斑蝥素的解毒代谢功能的空白。2.小菜蛾PxGSTs对唑虫酰胺的解毒代谢作用关于昆虫GSTs在唑虫酰胺解毒代谢中的作用目前还知之甚少。我们以小菜蛾为研究对象通过RT-q PCR分析发现,小菜蛾在经唑虫酰胺处理后PxGSTs（PxGSTδ、PxGSTσ和PxGSTε）的表达量明显上调。体外抑制实验和代谢实验发现,唑虫酰胺对PxGSTs具有一定的抑制效果,并且PxGSTs能够在体外代谢唑虫酰胺,其中PxGSTσ具有最高的代谢效率。基于分子对接的结合模式分析结果表明,Tyr107和Tyr162侧链提供的氢键是PxGSTσ代谢唑虫酰胺的关键相互作用。对Tyr107（PxGSTσY107A）和Tyr162（PxGSTσY162A）位点进行丙氨酸定点突变后发现,突变体蛋白对唑虫酰胺的结合和代谢能力大幅度下降,揭示了PxGSTs和唑虫酰胺之间的代谢相互作用,并阐明了PxGSTσ对唑虫酰胺代谢的分子机理,为新型唑虫酰胺类杀虫剂的设计和优化提供了新的方法。3.小菜蛾PxGSTs与其抑制剂GTX的相互作用昆虫GSTs参与了多种杀虫剂的代谢抗性,以GST抑制剂GTX为分子探针可以揭示杀虫剂抑制昆虫GSTs的分子机理。我们采用同源性模建和分子对接的方法构建了PxGSTσ与GTX分子的三维结构模型（PxGSTσ-GTX）,并通过分子动力学（MD）模拟和结合自由能计算描述了PxGSTσ-GTX复合物的稳定性。通过结合自由能的分析发现,PxGSTσ-GTX复合物的形成和稳定主要由氨基酸残基侧链提供的氢键和疏水相互作用来驱动。通过丙氨酸扫描和定点诱变发现,Lys43和Arg99是PxGSTσ与GTX结合的关键氨基酸位点。并且结合唑虫酰胺与PxGSTσ相互作用的关键位点分析,发现Tyr107可能是化合物对PxGSTσ产生抑制作用的关键残基。该结果为研究现有杀虫剂抑制GST解毒酶系的分子机理提供了结构生物学的参照,为评估新型杀虫剂与GST解毒酶系的相互作用提供了理论指导。4.小菜蛾羧酸酯酶PxEst-6对拟除虫菊酯的代谢机理羧酸酯酶（Car Es）是昆虫体内一种涉及拟除虫菊酯抗药性的解毒酶。我们通过RT-q PCR分析发现,PxEst-6在小菜蛾三龄幼虫的中肠和表皮内高表达,在经4种拟除虫菊酯类杀虫剂（联苯菊酯,氟氯氰菊酯,氯氰菊酯和λ-氯氟氰菊酯）处理后,PxEst-6的表达量迅速上调。通过杀虫剂代谢实验发现PxEst-6具有代谢这4种拟除虫菊酯杀虫剂的能力。通过三维结构模建、分子对接和分子动力学模拟分析了PxEst-6与拟除虫菊酯的结合模式,揭示了参与代谢的关键氨基酸残基和相互作用方式,结果表明PxEst-6通过Gln431、His451和Lys458残基与拟除虫菊酯的乙酸酯基团发生极性或氢键相互作用从而对其进行代谢,并以丙氨酸定点突变对这一结果进行了验证,阐明了PxEst-6代谢拟除虫菊酯类杀虫剂的分子机理。
冯振月[4]（2020）在《大肠杆菌ABC家族药物外排转运体YbhFSR及YddA功能的研究》文中认为ATP-结合盒（ATP-binding cassette,ABC）超家族转运体广泛的分布于细菌、真菌和真核生物体内,能够利用水解ATP产生的能量逆浓度梯度转运从小分子到较大化合物的各种底物。ABC家族转运体是引起人类肿瘤细胞耐药和细菌耐药的一个重要因素。大肠埃希氏菌（Escherichia coli）K-12菌株基因组预测编码11个ABC家族外排转运体,其中,YbhFSR和YddA被推测为药物外排转运体,但其确切功能尚缺乏实验研究。对细菌ABC家族预测药物外排转运体功能的研究对于了解细菌的耐药性乃至解读人类肿瘤的耐药性机制具有重要意义。本研究首先对E.coli YbhFSR和YddA转运体进行系统的生物信息学分析。分析显示,YbhFSR转运体由三个独立的蛋白质YbhF、YbhS和YbhR组成,YbhF蛋白属于ABC家族核苷酸结合结构域,YbhS和YbhR属于ABC家族的跨膜结构域。YddA转运体NH2-端为5个α-螺旋基序构成的跨膜结构域,COOH-端为ABC家族核苷酸结合结构域。为研究YbhFSR和YddA转运进功能,利用Red重组技术分别构建了基因敲除菌株E.coliΔybhF、E.coliΔybhR、E.coliΔybhS、E.coliΔybhSR、E.coliΔybhFSR、E.coliΔacr B和E.coliΔacrBΔybhF;此外构建了ybhF过表达菌株E.coli/pET28a-ybhF。为研究YddA转运体功能,构建了yddA敲除菌株E.coliΔyddA、E.coliΔyddAΔacrB和E.coliΔyddB。通过孔雀绿试验方法研究了纯化的YbhF蛋白的ATPase活性。结果显示,与对照空质粒菌株纯化蛋白相比,过表达菌株YbhF蛋白ATP酶活性显着高于对照组,YbhF蛋白具有ABC家族的核苷酸结合结构域,能够利用水解ATP释放能量转运底物。以溴化乙锭（ethidium bromide,EB）为底物检测YbhFSR转运体及YddA转运体的外排能力,结果显示,与对照菌株E.coli/pET28a相比,过表达菌株E.coli/pET28a-ybhF具有增强EB外排的能力,而基因敲除菌株E.coli?acrB、E.coli?ybhF和E.coli?acrB?ybhF外排EB能力均降低,特别是E.coliΔacrBΔybhF外排EB能力降低最明显。E.coliΔyddA的EB外排能力明显降低。以上结果表明YbhFSR及YddA转运体都具有外排EB的能力,YbhFSR和YddA转运体属于ABC家族的外排转运体。通过药物敏感性实验筛选YbhFSR及YddA转运体可能外排的底物。结果显示,YbhFSR转运体只对四环素、土霉素、金霉素和强力霉素四种四环素类药物以及外排泵通用阳离子底物EB和Hoechst33342具有敏感性,以上结果表明YbhFSR转运体属于四环素类药物单药外排转运体。而YddA转运体对20种药物中的13种具有敏感性,表明YddA转运体是多药外排转运体。利用四环素类药物和喹诺酮类药物自发荧光的性质,研究了药物在细胞内的积累和外排情况。结果表明,E.coli?acrB、E.coli?ybhF和E.coli?acrB?ybhF三株细菌四环素类药物外排能力降低,同时四环素类药物在细胞内积累增加;E.coliΔyddA外排诺氟沙星的能力显着降低,诺氟沙星在胞内积累增加。为进一步证实两种转运体的药物外排作用和能量来源,实验中分别使用了三种抑制剂（原矾酸盐、CCCP和利血平）及其它已知多药外排泵底物。结果显示,YbhFSR外排四环素能力受到原矾酸盐和CCCP的显着抑制,YbhFSR转运体的能量来源是ATP。YddA转运体外排诺氟沙星的能力受到原矾酸盐和利血平显着抑制,同时也能被其它已知多药外排泵底物抑制,表明YddA转运体的能量来源是ATP,且能够识别和转运多个底物。实验进一步将pET28a-ybhF和pET28a空质粒转入E.coli Na+缺陷型菌株KNabc中,过表达ybhF赋予了KNabc菌株对NaCl、LiCl和碱性pH的耐受性,证明YbhF具有Na+（Li+）/H+逆向转运功能。上述结果表明,E.coli的YbhFSR是ABC家族的单药外排转运体,可发挥四环素类药物外排和Na+（Li+）/H+逆向转运的双重作用。YddA转运体是ABC家族的多药外排转运体。
许皖[5]（2020）在《葛花、枳椇子及其配伍对急性酒精性肝损伤小鼠保护作用的实验研究》文中研究指明研究背景:“酒精滥用”和“酒精依赖”是造成酒精性肝病高发病率和死亡率的主要危险因素,已成为仅次于病毒性肝病的第二大肝病,严重危害人类健康。酒精性肝脏疾病是由急性或慢性饮酒引起的肝脏代谢疾病,早期以单纯性脂肪肝病变为主,继而向脂肪性肝炎、肝纤维化、肝硬化和肝癌等不可逆病变发展。尽管酒精性肝脏疾病对全球的经济和健康产生了深远的影响,但目前对于该病治疗药物的研究进展甚微,除戒酒和营养支持外,尚无令人满意的治疗策略。酒精性肝病当属中医“酒疸”、“酒痨”、“酒癖”、“酒臌”、“伤酒”、“酒中毒”等范畴。急性酒精性肝损伤的发生,主要是由于酒食不节,酒毒湿热之邪蕴阻中焦,继而伤及脾胃,致运化失司,水湿失运,变生痰浊,而后湿热搏结,阻滞中焦或土雍木郁,致肝脾同病。其病位在肝,涉及胆、脾、胃,酒毒湿热之邪蕴结体内是根本病机。葛花和枳椇子为我国传统解酒中药,古代医药文献有对两药同用解酒毒的记载。葛花发散宣透,引湿热从肌表而散枳椇子渗泄利尿,使湿热之邪从小便而下,二者配伍,散渗结合,分消湿浊,因势利导,使酒湿邪气排出体外,起到解酒保肝的作用。课题组前期已经完成单味中药葛花、枳椇子对急性酒精中毒性治疗,并进行了葛花枳椇子不同比例配伍对慢性酒精性肝损伤的实验研究,研究明确了二者配伍对酒精性肝损伤显示出一定的防治作用,可以不同程度地改善相关指标,起到解酒护肝的作用。研究目的:酒精性肝损伤是全球亟待解决的公共卫生问题之一,是疾病晚期难以治愈的进行性疾病,若早期阶段能及时防治,可阻止其向不可逆病变发展,故防治急性酒精性肝损伤尤为迫切,但目前相关研究较薄弱。乙醛介导的毒性,氧化应激和脂质代谢失衡通常认为与酒精性肝病的发病密切相关。转录因子Nrf2是防治氧化应激介导疾病的关键治疗靶标,Keap1-Nrf2-ARE信号通路是调控细胞保护酶的关键调节剂,在酒精性肝损伤的早期发挥着重要作用。故本课题在前期研究的基础上,以葛花和枳椇子配伍为研究对象,开展二者配伍对酒精引起的急性肝脏损伤保护作用的实验研究。采用白酒灌胃复制动物模型,动态观察肝损伤情况,通过生物化学、组织病理学、分子生物学等技术方法,探讨二者配伍能否激活Keap1-Nrf2-ARE通路诱导抗氧化酶活性而保肝。中医理论认为急性酒精性肝损伤的发生,主要是由于湿热毒邪蕴结体内,损伤及脾,致脾之运化功能失司,累及肝胆,诱发“伤酒”。越来越多的证据显示,水通道蛋白AQPs的正常表达可能是运化水湿,津液输布,维持体内水代谢稳态的分子生物学基础,而AQP表达异常可能是湿热证病理机制之一。酒精诱导的氧化应激在急性酒精性肝病的早期阶段发挥着重要作用,是引发脂质代谢异常,促进脂质过氧化,造成肝脏脂质蓄积的关键因素。水甘油通道蛋白AQP9是参与甘油和甘油三酯代谢的重要通道蛋白,在调控脂质代谢,维持甘油代谢平衡方面发挥着重要作用。故本研究同时尝试结合中医发病机制,探讨二者配伍能否影响水-甘油通道蛋白AQP9表达而调节肝中脂质代谢,从而研究药物对急性酒精性肝损伤的保护作用,为临床用药提供科学依据,并为开展其他酒精性相关疾病的研究提供思路和借鉴。研究方法:1.葛花、枳椇子及其配伍对急性酒精性肝损伤小鼠乙醇代谢的影响:小鼠按体重随机分成模型组、阳性对照药（水飞蓟宾）组、葛花组、枳椇子组、葛花枳椇子配伍Ⅰ（1:1）组、葛花枳椇子配伍Ⅱ（1:2）组、葛花枳椇子配伍Ⅲ（2:1）组,共计7组,每组15只。采用56%（V/V）红星二锅头白酒,一次大量灌胃（模型Ⅰ组）和连续多次灌胃（模型Ⅱ组）两种方法复制急性酒精性肝损伤动物模型。根据酒精在体内的代谢特点,分别于酒后不同时间点（1h、4h和10d）取材,运用顶空气相色谱法和紫外-可见分光光度法检测血液中乙醇浓度和肝中乙醇脱氢酶活性。2.葛花、枳椇子及其配伍对急性酒精性肝损伤小鼠肝脏功能、血脂水平和肝组织病理形态的影响:小鼠按体重随机分成空白组、模型组、阳性对照药（水飞蓟宾）组、葛花组、枳椇子组、葛花枳椇子配伍Ⅰ（1:1）组、葛花枳椇子配伍Ⅱ（1:2）组、葛花枳椇子配伍Ⅲ（2:1）组,共计8组,每组15只。采用56%（V/V）红星二锅头白酒,一次大量灌胃（模型Ⅰ组）和连续多次灌胃（模型Ⅱ组）两种方法复制急性酒精性肝损伤动物模型。根据血清酶学改变特点,分别于酒后不同时间点（4h、6h、12h、16h和10d）取材,检测肝功能（ALT、AST、ALP、ALB和TP含量）、血脂水平（TG和CHO含量）及肝组织形态变化。3.葛花、枳椇子及其配伍对急性酒精性肝损伤小鼠肝脏组织氧化应激的影响:运用紫外分光光度法检测酒后不同时间点（4 h、6 h、12 h、16 h和10 d）小鼠肝脏组织中SOD、MDA和GSH的吸光度,荧光分光光度法测定肝组织中ROS的吸光度,并计算其在组织中的活力。4.葛花、枳椇子及其配伍对急性酒精性肝损伤小鼠保护作用机制的探讨:运用RT-PCR和Western blot方法,分析检测酒后不同时间点（12 h和10 d）小鼠肝脏组织中Keap 1、Nrf2和AQP9 mRNA和蛋白表达水平。研究结果:1.葛花、枳椇子及其配伍对急性酒精性肝损伤小鼠血液乙醇浓度与肝中乙醇脱氢酶的影响:①酒精性肝损伤模型Ⅰ组小鼠（酒后1h和4h）:与模型组相比,葛花、枳椇子及各配伍组（1:1、1:2和2:1）均显着降低血液中乙醇浓度,并升高肝脏乙醇脱氢酶活性,其中葛花-枳椇子（2:1）组在促进乙醇的代谢方面具有较好的治疗作用,显现出较好的解酒作用。②酒精性肝损伤模型Ⅱ组小鼠（酒后10d）:与模型组相比,葛花、枳椇子及各配伍组（1:1、1:2和2:1）血清中乙醇含量显着降低,肝组织中乙醇脱氢酶活性增强,即各给药组通过调控ADH脱氢酶系统,促进乙醛的消除,并减轻乙醇诱导的肝脏损伤,显现出一定的解酒作用。其中,葛花-枳椇子（2:1）组在加速酒精代谢方面,显现出较好的治疗作用,具有出较好的解酒作用。2.葛花、枳椇子及其配伍对急性酒精性肝损伤小鼠肝脏功能与肝组织病理形态学的影响:①酒精性肝损伤模型Ⅰ组小鼠（酒后4h、6h、12h和16h）:与空白组相比,模型组小鼠血清AST、ALT和ALP水平显着升高,TP和ALB含量显着降低,光镜下肝小叶和肝索结构紊乱,肝细胞水肿或空泡变性,并伴有炎性细胞浸润、脂肪滴的形成,即酒精造成肝脏组织及功能受损,提示模型复制成功。与模型组相比,葛花、枳椇子及各配伍组（1:1、1:2和2:1）均可显着降低小鼠血清中AST、ALT和ALP水平,升高小鼠血清TP和ALB含量,从而改善小鼠的肝脏功能。葛花-枳椇子（2:1）组在改善酒精（酒后12h）造成的肝脏血清转氨酶及肝脏蛋白质合成功能异常方面优于其它各给药组。此外,各给药组均不同程度地改善酒精诱发的微泡样脂肪变性、脂质滴积聚、肝细胞水肿和炎性损伤等病理改变,对酒精诱发的急性肝损伤具有保护作用。②酒精性肝损伤模型Ⅱ组小鼠（酒后10 d）:与空白组相比,模型组小鼠血清ALT、AST和ALP含量显着升高,TP和ALB水平明显降低,表明酒精引起小鼠肝脏功能异常,造成了急性肝脏损伤。与模型组相比,葛花、枳椇子及各配伍组（1:1、1:2和2:1）均不同程度地改善肝脏功能和蛋白合成功能。葛花-枳椇子（2:1）组在改善肝脏功能及蛋白合成功能方面优于其它各给药组,即该配伍组对酒精诱导的肝损伤具有较好的肝保护作用。此外,各给药组均不同程度地改善酒精诱发的肝细胞肿胀、微泡样脂肪变性、炎性细胞浸润和脂质滴积累等病理变化。3.葛花、枳椇子及其配伍对急性酒精性肝损伤小鼠血脂水平及其作用机制的影响:①酒精性肝损伤模型Ⅰ组小鼠（酒后4h、6h、12h和16h）:与空白组相比,模型组小鼠血清TG和CHO水平显着升高,即酒精造成小鼠血脂功能的异常。与模型组相比,葛花、枳椇子及各配伍组（1:1、1:2和2:1）均显着改善血清脂质代谢紊乱。葛花-枳椇子（2:1）组在降低酒精（酒后12h）引起的血清TG和CHO水平升高方面优于其他各给药组。此外,葛花、枳椇子及其各配伍组（1:1、1:2和2:1）均能抑制AQP9的表达,减少肝细胞对甘油的摄入,改善脂质代谢,从而有效缓解肝脏脂肪变性,起到保护肝脏的作用。各给药组在调控AQP9表达,缓解酒精引起的脂质代谢异常方面,均无显着差异。②酒精性肝损伤模型Ⅱ组小鼠（酒后10 d）:模型组小鼠血清TG和CHO水平显着高于空白组,即急性酒精摄入造成小鼠脂质代谢紊乱。葛花、枳椇子及各配伍组（1:1、1:2和2:1）均显着降低血清TG和CHO的水平,并抑制AQP9的表达,对酒精造成的血脂异常具有一定的改善作用,起到保护肝脏的作用。葛花-枳椇子（2:1）组在改善急性酒精摄入造成的高脂血症方面优于其他各给药组,即该配伍组在减少肝脂质积累,缓解脂质代谢异常方面显现出较好的治疗作用。4.葛花、枳椇子及其配伍对急性酒精性肝损伤小鼠肝脏氧化与抗氧化平衡及其作用机制的影响:①酒精性肝损伤模型Ⅰ组小鼠（酒后4 h、6 h、12 h和16 h）:与空白组相比,模型组小鼠肝脏SOD和GSH水平均明显降低,MDA和ROS活力均显着升高,即表明单次大剂量酒精灌胃会造成小鼠氧化应激损伤。与模型组相比,葛花、枳椇子及各配伍组（1:1、1:2和2:1）均可增强抗氧化酶活性,促进肝细胞对脂质过氧化产物的清除,即各给药组均具有抗氧化应激作用,对酒精诱导的肝脏损伤具有潜在的保护作用。其中葛花-枳椇子（2:1）组在增强抗氧化活性,抑制脂质过氧化作用,缓解酒精（酒后12 h）介导的肝细胞氧化应激损伤方面显现出较好的治疗作用,即该配伍组可显着预防酒精引起的急性肝损伤。此外,葛花、枳椇子及各配伍组（1:1、1:2和2:1）可通过抑制Keap1表达,激活Nrf2表达,从而有效地抑制自由基的产生和脂质过氧化,缓解小鼠氧化应激反应,保护肝脏免受酒精诱导的肝细胞损伤。各给药组在调控Keap1-Nrf2-ARE信号传导通路,保护肝组织免受酒精诱导的氧化损伤方面,均无显着差异。②酒精性肝损伤模型Ⅱ组小鼠（酒后10 d）:与空白组相比,模型组小鼠在白酒连续灌胃10天后,肝脏SOD和GSH活性均明显降低,MDA和ROS含量均显着升高,即表明连续大量酒精摄入会造成小鼠氧化应激损伤。与模型组相比,葛花、枳椇子及各配伍组（1:1、1:2和2:1）均通过激活Keap1-Nrf2-ARE信号通路,增强肝脏内抗氧化酶的表达（SOD和GSH）,加快脂质过氧化物（MDA和ROS）分解代谢,减少酒精对小鼠肝组织的损害。此外,葛花-枳椇子（2:1）组在增强小鼠抗氧化能力,减轻脂质过氧化作用,改善氧化应激诱导的细胞损伤方面优于其他各给药组,即该配伍组对缓解酒精诱导的肝损伤表现出积极作用。研究结论:综上所述,本研究证实葛花、枳椇子及各配伍组（1:1,1:2和2:1）对酒精诱导的急性肝损伤具有保护作用。首先,各给药组通过激活Keap1-Nrf2-ARE信号通路,增强抗氧化酶活性,减轻脂质过氧化作用,改善氧化应激诱导的细胞损伤,从而缓解酒精对小鼠的肝脏损害,发挥保护肝脏的作用。其次,各给药组通过调控水-甘油通道蛋白AQP9的表达,降低甘油的渗透性,减少甘油的摄入,改善肝脏脂质代谢异常,从而缓解酒精诱导的氧化应激和肝脂肪变性,起到保护肝细胞的作用。值得注意的是,葛花-枳椇子（2:1）组在促进酒精代谢,改善肝脏功能,减轻肝脏脂肪变性,提高小鼠抗氧化能力方面显现出积极作用,即该配伍组对酒精诱导的肝脏损伤具有较好的保护作用。因此,本研究证实葛花枳椇子配伍对急性酒精性肝损伤显示出一定的防治作用,并明确了二者配伍产生相须为用、协同增效的功用,具有增强解酒保肝的效果,是治疗酒精性肝病的天然解酒保肝药物,为临床应用葛花枳椇子防治急性酒精性肝损伤提供了科学依据。
刘中兵[6]（2020）在《川陈皮素抑制IL-21/IL-21R介导类风湿关节炎的炎症反应研究》文中认为第一部分:川陈皮素抑制IL-21/IL-21R介导类风湿关节炎的炎症反应体外研究目的:充分探讨川陈皮素靶向IL-21调控类风湿关节炎免疫应答过程,确定其与IL-21/IL-21R及JAK1/STAT3信号通路在调控过程中的介导关系,确定川陈皮素在类风湿关节炎发生、发展过程中的价值性,为后期临床治疗类风湿关节炎提供研究方向。材料与方法:我们使用的是RASFs细胞系,即MH7A细胞,它来自RA患者,被认为是RA的主要效应细胞。MH7A细胞系使用含10%胎牛血清的1640完全培养基于37℃、5%CO2、100%的恒温培养箱中培养,具体分组如下:Control组（不做处理）;IL-21组（50 ng/ml IL-21处理MH7A细胞）;IL-21+Nobiletin 25μM组（50ng/ml IL-21+25μmol/L Nobiletin处理MH7A细胞）;IL-21+Nobiletin 50μM组（50ng/ml IL-21+50μmol/L Nobiletin处理MH7A细胞）;MH7A细胞干预结束后,继续培养48小时后进行相关项目分析:细胞因子分析:ELISA检测各组细胞中IL-6、TNF-α、HMGB1、MMP-3、MMP-13表达浓度分析;各组MH7A细胞ROS（活性氧）检测;各组MH7A细胞4-HNE（4-羟基壬烯醛）检测;RT-PCR检测IL-21R、IL-6、TNF-α、MMP-3、MMP-13表达浓度分析;Western-blot检测IL-21R及JAK1/STAT3信号通路关键蛋白表达分析;统计数据,给出结论。结果:ELISA化学检测:IL-6、TNF-α:各组MH7A细胞中的表达趋势为Control<IL-21+Nobiletin 50μM<IL-21+Nobiletin 25μM<IL-21,各组数据比较,P<0.05,差异具有统计学意义;HMGB1蛋白:各组MH7A细胞中的表达趋势为Control<IL-21+Nobiletin 50μM<IL-21+Nobiletin 25μM<IL-21,各组数据比较,P<0.05,差异具有统计学意义;MMP-3、MMP-13:各组MH7A细胞中的表达趋势为Control<IL-21+Nobiletin 50μM<IL-21+Nobiletin 25μM<IL-21,各组数据比较,P<0.05,差异具有统计学意义;4-HNE检测:各组MH7A细胞中的表达趋势为Control<IL-21+Nobiletin50μM<IL-21+Nobiletin 25μM<IL-21,各组数据比较,P<0.05,差异具有统计学意义;ROS检测:各组MH7A细胞中的ROS表达趋势为Control<IL-21+Nobiletin50μM<IL-21+Nobiletin 25μM<IL-21,各组数据比较,P<0.05,差异具有统计学意义;RT-PCR检测:IL-21R:各组MH7A细胞m RNA表达趋势为Control<IL-21+Nobiletin 50μM<IL-21+Nobiletin 25μM<IL-21,各组数据比较,P<0.05,差异具有统计学意义;IL-6、TNF-α:各组MH7A细胞中的表达趋势为Control<IL-21+Nobiletin 50μM<IL-21+Nobiletin 25μM<IL-21,各组数据比较,P<0.05,差异具有统计学意义;MMP-3、MMP-13:各组MH7A细胞中的表达趋势为Control<IL-21+Nobiletin 50μM<IL-21+Nobiletin 25μM<IL-21,各组数据比较,P<0.05,差异具有统计学意义;Westwen-blot检测:IL-21R:各组MH7A细胞蛋白浓度表达趋势为Control<IL-21+Nobiletin 50μM<IL-21+Nobiletin 25μM<IL-21,各组数据比较,P<0.05,差异具有统计学意义;JAK1/STAT3信号通路:各组MH7A细胞中JAK1、STAT3蛋白表达差异性较小,P>0.05,差异不具有统计学意义;在其磷酸的表达过程中,各组MH7A细胞中的表达趋势为Control<IL-21+Nobiletin 50μM<IL-21+Nobiletin25μM<IL-21,各组数据比较,P<0.05,差异具有统计学意义。结论:（1）川陈皮素可以靶向IL-21受体对MH7A细胞做出免疫应答过程,明显降低MH7A滑膜细胞内白细胞介素以及基质金属蛋白酶等浓度变化,缓解MH7A滑膜细胞的炎性进展过程,促进其修复过程,且随着川陈皮素浓度增加,这种趋势更加明显。（2）川陈皮素可以靶向IL-21受体对细胞经典信号通路JAK1/STAT3进行调控应答,降低细胞信号通路关键蛋白JAK1及STAT3等蛋白的磷酸化水平,减缓炎症过程,与上文的结论具有一致性。由此可以得知,川陈皮素在类风湿关节炎的发生、发展过程中可能具有潜在的研究价值,为后期临床治疗类风湿关节炎提供靶向研究导向。第二部分:川陈皮素抑制IL-21/IL-21R介导类风湿关节炎的炎症反应体内研究目的:在体外研究的基础上,体内研究进一步探讨了川陈皮素靶向IL-21调控类风湿关节炎的免疫应答过程,从而明确了其与IL-21/IL-21R及JAK1/STAT3信号通路在调控过程中的介导关系,表明了川陈皮素在抗类风湿关节炎症作用方向的价值性,为后期临床治疗类风湿关节炎提供研究方向。材料与方法:选取48只Wistar大鼠适应性饲养1周后将其随机分成4组,除去对照组大鼠,其余建立CIA模型;具体分组如下:Control组（大鼠不做处理）;IL-21组（CIA模型+50 ng/ml IL-21,腹腔注射）;IL-21+Nobiletin 25μM组（CIA模型+50 ng/ml IL-21+25μmol/L Nobiletin,腹腔注射）;IL-21+Nobiletin 50μM组（CIA模型+50 ng/ml IL-21+50μmol/L Nobiletin,腹腔注射）;继续饲养6周后将大鼠处死,进行相关项目分析:各组大鼠模型成功率检测:大体观察、体重指数、关节炎、关节指数分析;形态学分析:各组大鼠HE染色分析;ELISA检测分析:IL-21R、TNF-α、IL-6、HMGB1、MMP-3及MMP-13蛋白;RT-PCR检测分析IL-21R、TNF-α、IL-6、MMP-3及MMP-13m RNA表达分析;Western-blot检测分析IL-21R、TNF-α、IL-6、MMP-3及MMP-13及JAK1/STAT3通路分析,分析数据,给出结论。结果:模型成功率检测:临床表现:对照组大鼠精神状态较好,体重体现出稳步增长的趋势,毛发光泽性较差;模型组大鼠意志沉迷,进食量逐渐减少,毛发光泽性,2周后处于无法负重的状态;体重变化:两周后各组大鼠的体重变化趋势为IL-21<IL-21+Nobiletin 25μM<IL-21+Nobiletin 50μM<Control,各组之间体重比较,差异具有统计学意义（P<0.05）;关节炎发病率/关节指数:各组关节炎发病率比较趋势为Control<IL-21+Nobiletin 50μM<IL-21+Nobiletin 25μM<IL-21,数据分析差异具有统计学意义（P<0.05）.形态学分析:HE染色:对照组大鼠踝关节组织细胞排列密集,形态规则,轮裹明显;模型组大鼠踝关节组织细胞层变厚,白细胞和淋巴细胞大量充斥,连续性减弱;川陈皮素干预后,大鼠的踝关节组织细胞排列密集性加强,细胞形态趋于正常。ELISA化学检测:IL-6、TNF-α:表达趋势为Control<IL-21+Nobiletin50μM<IL-21+Nobiletin 25μM<IL-21,P<0.05,差异具有统计学意义;HMGB1蛋白:表达趋势为Control<IL-21+Nobiletin 50μM<IL-21+Nobiletin 25μM<IL-21,P<0.05,差异具有统计学意义;MMP-3、MMP-13:表达趋势为Control<IL-21+Nobiletin50μM<IL-21+Nobiletin 25μM<IL-21,P<0.05,差异具有统计学意义。RT-PCR检测:IL-21R:表达趋势为Control<IL-21+Nobiletin 50μM<IL-21+Nobiletin25μM<IL-21,P<0.05,差异具有统计学意义;IL-6、TNF-α:表达趋势为Control<IL-21+Nobiletin 50μM<IL-21+Nobiletin 25μM<IL-21,P<0.05,差异具有统计学意义;MMP-3、MMP-13:表达趋势为Control<IL-21+Nobiletin 50μM<IL-21+Nobiletin 25μM<IL-21,P<0.05,差异具有统计学意义。Westwen-blot检测:IL-21R:表达趋势为Control<IL-21+Nobiletin 50μM<IL-21+Nobiletin 25μM<IL-21,P<0.05,差异具有统计学意义;IL-6、TNF-α:各组MH7A细胞中的表达趋势为Control<IL-21+Nobiletin 50μM<IL-21+Nobiletin 25μM<IL-21,P<0.05,差异具有统计学意义;MMP-3、MMP-13:表达趋势为Control<IL-21+Nobiletin50μM<IL-21+Nobiletin 25μM<IL-21,P<0.05,差异具有统计学意义;JAK1/STAT3信号通路:各组MH7A细胞中JAK1、STAT3蛋白表达差异性较小,P>0.05,差异不具有统计学意义;在其磷酸的表达过程中,表达趋势为Control<IL-21+Nobiletin 50μM<IL-21+Nobiletin 25μM<IL-21,P<0.05,差异具有统计学意义。结论:（1）川陈皮素可以较好的改善模型组大鼠关节炎效应,明显改善大鼠的精神状态,降低大鼠的类风湿关节炎症的程度及关节指数,为后续的研究提供帮助。（2）与体外研究结果一致,川陈皮素改善大鼠类风湿关节炎症的作用主要是通过靶向机体IL-21R浓度变化进而调控JAK1/STAT3的活性状态,充分降低白细胞介素、肿瘤坏死因子-α、高迁移率蛋白表达,逐渐恢复关节软骨基质合成及分解的平衡状态,加速类风湿关节炎疾病的康复过程,达到对类风湿关节炎的治疗效果,给予临床一定启发。
张芸兀[7]（2020）在《基于代谢组学的嫩椰子品质变化机制与控制研究》文中研究说明嫩椰子是一种成熟度为6-9个月的椰子,嫩椰子水的味道甜美,深受消费者的喜爱,但由于运输成本高,贮藏期短其商业发展受到了很大的限制,这不能用现有的研究来解释。采用UPLC-MS/MS和GC-MS技术的代谢组学方法,对冷藏条件下椰子水中的代谢物进行了鉴定和统计分析。UPLC-MS/MS条件下,对嫩椰子储藏过程中各组样本进行PCA、PLS-DA和OPLS-DA进行分析。PCA得分图显示在NT-pos条件下,各样本均在95%可信区间内,分离周数不够;在NT-neg条件下,分离周数极差,除1组1个点外,大多数样本的置信区间为95%。PLS-DA得分图显示在NT-pos条件下,5、6、7组样品重叠,而在NT-neg条件下,5、6、7组样品重叠;置换检验图显示所有Q2点都低于最右边的原始Q2点。OPLS-DA评分显示,在NT-pos和NT-neg条件下,所有样本均分化良好。对鉴定出的所有112种差异代谢物被进行层次聚类分析。树状图将样本分为两类。当观察到这两类样本的分布模式时,第一组（第0周）的所有样本均为第一类,而其他所有样本（第1-6周）均为第二类。这一发现表明第一组和第二组样本的代谢组学差异最大。对第一组和第二组中56种主要差异代谢物进行相关性分析。其中12种氨基酸与其他代谢物之间有20多种联系,其中赖氨酸与所有其他55种代谢物都有联系。L-苏氨酸与51种代谢物相连,L-蛋氨酸与45种代谢物相连,证明氨基酸在新陈代谢中起着重要的作用。GC-MS条件下,对嫩椰子储藏过程中各组样本进行PCA、PLS-DA和OPLS-DA进行分析。PCA得分图显示,各样本均在95%置信区间内,分离周数不够,3、4、5、6、7组样本有少量重叠。PLS-DA显示出分离周数极差,除第二组1个点外,大多数样本均在95%置信区间内;置换检验图显示所有蓝色Q2点都低于最右边的原始蓝色Q2点。OPLS-DA得分图显示,所有样本均分化良好,所有样本都得到了很好的分组。此外OPLS-DA得分图非常好的把样本分为,第一组（储存时间为0周）为一类,2、3、4、5、6和7组（储存时间为1-6周）为一类。通过KEGG途径和Met PA数据库进行的代谢途径分析,第一组和第二组中富集到的差异代谢物的代谢途径,共发现31条代谢途径。三种最重要的代谢途径是氨基酸途径:（1）甘氨酸、丝氨酸和苏氨酸代谢;（2）精氨酸和脯氨酸代谢;（3）半胱氨酸和蛋氨酸代谢。丙酮酸、L-丝氨酸、2-氧丁酸、L-亮氨酸、腐胺、L-组氨酸、L-天冬酰胺、L-苏氨酸、泛酸、O-乙酰-L-丝氨酸、L-赖氨酸、L-精氨酸和L-蛋氨酸至少参与两个途径,表明这些物质处于复杂网络途径的节点。丙酮酸参与12条途径,丝氨酸参与7条途径,说明丙酮酸和丝氨酸是每条途径的连接点。丙酮酸与氨基酸代谢密切相关。在以往的研究中,椰子汁的品质变化主要是由醛类和脂类引起的。在本研究中,氨基酸代谢被发现是导致椰子嫩水变质的另一个主要原因。在嫩椰子水的贮藏过程中,多种酶在氨基酸代谢中起着关键作用。通过以上代谢组学分析,酶活性控制可能是嫩椰子保质期的关键。研究复合保鲜技术对嫩椰子的保质期影响,最终得到最优条件。将去掉椰衣的嫩椰子,于25k Hz超声波处理20min,用PVC进行覆膜,储存于13℃,可有效延长嫩椰子保质期至8周。
蒋宇霞[8]（2019）在《基于代谢组学的孕激素去氢孕酮对斑马鱼的毒理效应》文中进行了进一步梳理人工合成孕激素的消耗量远远大于雌激素或雄激素,近二十年来其在环境研究中备受关注。许多孕激素影响鱼类的性别分化及繁殖,包括影响配子生成、产卵、性别分化和激素水平。去氢孕酮（dydrogesterone,DDG）是一种人工合成孕激素,广泛应用于妇产科疾病,包括激素替代治疗和复发性流产等。去氢孕酮是许多国家最常用的合成孕激素之一,在各种水环境中均有发现。最近的研究表明,环境中的去氢孕酮可能对鱼类产生内分泌干扰效应,它能增加斑马鱼的排卵后卵泡和闭锁卵泡的比率、促进卵子和精子生成、造成雄性偏多的性别比例和扰乱昼夜节律。因此去氢孕酮具有生态危害风险。已有多项研究证实去氢孕酮对斑马鱼有不良影响,大多数研究是基于组织学和转录组学方法,但是其对鱼类代谢的影响的数据还很匮乏。代谢物是细胞生理过程的最终产物,其变化可视为生物对遗传或环境变化的最终反应。代谢组学是对生物样品中所有代谢物进行综合分析的方法,已成为研究毒理机制的有效手段。因此,通过代谢组学方法研究去氢孕酮引起的代谢物变化及其相关通路是有意义的。本研究的目的是利用代谢组学、组织学和傅里叶变换红外光谱（FTIR）等方法探讨去氢孕酮影响斑马鱼的毒理效应。我们将斑马鱼胚胎分别暴露于0（C）、2.8（L）、27.6（M）和289.8（H）ng/L的去氢孕酮中。在暴露的第35天取部分幼年斑马鱼（35 dpf）进行代谢组学和红外光谱分析。其余斑马鱼仍暴露于去氢孕酮中直至性成熟（共140天）,然后分析暴露组和对照组斑马鱼的性腺、脑部和肝脏的代谢组学、组织学和FTIR变化。并结合本研究的结果和前人的相关研究结果分析去氢孕酮干扰斑马鱼生理功能的机理。所取得的主要进展包括:（1）去氢孕酮影响斑马鱼幼鱼的生理状态并以剂量依赖的方式增加雄性斑马鱼的百分比。红外光谱分析结果表明去氢孕酮导致35 dpf的斑马鱼幼鱼体内脂质和蛋白质的积累。幼鱼的代谢组学分析结果表明去氢孕酮使部分游离脂肪酸（特别是n-3多不饱和脂肪酸（PUFAs））、甘油单酯、酰基肉碱和有机酸水平升高,而溶血磷脂、尿酸和胆汁酸水平下降。去氢孕酮暴露也降低了单磷酸核苷和UDP-糖的含量,而增加了核苷及其碱基的含量。这些代谢物变化可能抑制了NF-κB/COX-2和Wnt/β-catenin通路,或激活了p53通路,从而导致斑马鱼幼鱼卵母细胞凋亡并开启卵巢向精巢的转化,最终导致更多斑马鱼发育为雄鱼。（2）去氢孕酮影响了斑马鱼性腺的生理状态和生殖功能。组织学切片结果显示,暴露140天后,去氢孕酮促进了成年斑马鱼性腺中卵子发生和精子发生。去氢孕酮导致雌鱼卵巢内的排卵后卵泡和闭锁卵泡增加。精巢红外光谱结果显示脂质的减少和DNA的增加。卵巢红外光谱结果显示蛋白质的积累。卵巢代谢组学结果显示,去氢孕酮增加了由蛋白质和脂质等大分子分解代谢形成的游离氨基酸、尿素、腐胺、游离脂肪酸、酰基肉碱和溶血磷脂等代谢物的浓度。去氢孕酮可能通过某些代谢物诱导卵母细胞成熟、排卵和卵母细胞过熟。花生四烯酸能诱导卵母细胞成熟,而5-oxo-6,8,11-eicosatetraenoic acid（5-oxo-ETE）及嘌呤能信号通路的代谢物能促进排卵。然而,前列腺素PGF2α含量下降可能会抑制产卵和受损卵泡组织降解,这解释了卵母细胞过熟的出现和闭锁卵泡的增加。（3）去氢孕酮影响了斑马鱼脑部的生理状态和昼夜节律功能。红外光谱的结果显示暴露组斑马鱼脑部核酸和碳水化合物含量的减少以及蛋白质二级结构的变化。暴露组雌鱼还出现脂质积累。代谢组学结果显示,暴露组斑马鱼脑中胆固醇、饱和脂肪酸和单磷酸核苷的含量均增加,而多不饱和脂肪酸、溶血磷脂和核苷的含量则降低。本研究中去氢孕酮引起的代谢物变化与我们前期研究中去氢孕酮引起的生物钟基因变化有明显的相关性。因此,去氢孕酮处理组斑马鱼脑部的代谢谱可能是昼夜节律紊乱的反映,某些代谢物如饱和脂肪酸、胆固醇和n-3PUFAs的变化可能是去氢孕酮干扰正常昼夜节律的一种途径。（4）去氢孕酮影响了斑马鱼肝脏的生理状态。组织切片结果显示去氢孕酮导致雌性斑马鱼肝脏发生形态学改变,但对雄性斑马鱼肝脏没有影响。红外光谱结果显示去氢孕酮暴露导致雄鱼肝脏中脂质和蛋白质有关的吸收减少和糖类相关的吸收增加,但对雌鱼肝脏的影响不一样。代谢组学结果显示两种性别的斑马鱼肝脏的代谢物本底浓度有差异。且雌鱼肝脏中很多代谢物被去氢孕酮增加,而雄鱼肝脏中大部分代谢物被去氢孕酮降低。这些结果表明去氢孕酮对斑马鱼肝脏的影响有显着的性别差异性。斑马鱼肝脏中与代谢相关的基因存在天然的性别差异性,这可能导致了雌雄肝脏代谢物本底水平的差异。脂质等代谢物对去氢孕酮响应的性别差异可能与细胞色素P450（CYP）酶有关,因为CYP3A65等酶既能代谢去氢孕酮又能代谢脂肪酸等内源性物质。综上所述,去氢孕酮暴露导致了斑马鱼组织形态、生物大分子和小分子代谢物的改变。去氢孕酮主要通过脂肪酸（包括饱和脂肪酸、n-6 PUFAs和n-3 PUFAs）和嘌呤能信号通路的代谢物干扰了斑马鱼的性别分化、生殖和昼夜节律等生理功能。本研究有助于理解和应对孕激素类物质对水生生物的危害。
胡玲玲[9]（2019）在《特异结合胶原的红细胞药物载体构建及脊髓损伤修复研究》文中提出脊髓损伤（Spinal cord injury,SCI）后导致一系列的病理反应,在损伤部位形成抑制神经再生的微环境,这就给神经组织的再生修复带来了巨大挑战。目前单一的疗法通常仅能导致有限的功能改善,结合药物、生长因子、种子细胞和生物支架材料的复合疗法是目前脊髓损伤修复的主要趋势。近期的研究表明,低剂量的紫杉醇（Paclitaxel,PTX）可以抑制啮齿动物SCI模型中回缩球的形成,刺激轴突延长,对于神经干细胞向神经元细胞的分化和改善抑制性分子的沉积也具有一定的促进作用。然而这些药物分子本身的半衰期较短,且当它们与胶原支架结合时,因脑脊液的快速冲刷等多种因素的作用,导致在损伤部位的过快释放,达不到有效的治疗浓度。基于以上延长药物半衰期和局部浓度维持的两个问题,本文构建了可特异性结合胶原的红细胞载药体系。一方面,利用红细胞（Red blood cell,RBC）作为药物载体,包载紫杉醇,达到延长药物释放时间的目的。另一方面,通过特异性功能连接多肽的引入,实现胶原和红细胞的特异性连接,减少了药物在移植后的快速流失,达到在损伤局部的浓度维持的目的。将上述体系结合胶原支架移植入大鼠的T10全横断脊髓损伤模型内,以检验该载药体系的有效性。通过扫描电镜和流式细胞术的结果均表明功能多肽的添加,使载药红细胞能与胶原支架特异结合。并且,与对照组相比,支架上的紫杉醇的释放时间显着增加,在48h内释放了约70.77%,显示出延长药物释放的作用。在大鼠的脊髓损伤修复的三个月内,利用免疫组化手段对损伤区的神经再生情况进行评价。结果显示,功能多肽连接的红细胞载药组相较其它实验组,大鼠脊髓损伤区内显示出最高的神经元的数量。此外,该体系担载紫杉醇的治疗还具有增强脊髓损伤后轴突再生和减少瘢痕形成的潜力。通过Basso-Beattie-Bresnahan（BBB）运动评分,损伤大鼠的行为学功能也有了更进一步的提高。总之,可特异性结合胶原的红细胞载药体系能够实现治疗紫杉醇的成功包载与延长释放,并通过功能多肽将载药红细胞特异性锚定在支架材料上,维持局部的药物浓度。从而改善损伤大鼠的神经再生情况和行为功能的恢复效果,提高了修复质量。这个策略可能为药物与生物支架材料复合治疗脊髓损伤提供了一种可行的思路,以及一个潜在的治疗策略。
魏益娟[10]（2018）在《抗高血压1,4-二氢吡啶药物通过靶向核受体FXR保护肝脏的结构机理研究》文中进行了进一步梳理法尼醇X受体（FXR）在调节胆汁酸合成和胆固醇稳态等方面具有重要作用。尽管FXR作为代谢疾病的药物靶点受到相当多的关注,但FXR选择特异性配体仍有很大的研究意义和治疗潜力。本论文就筛选发现的抗高血压药物靶向FXR调控肝脏代谢的分子机制及其构效关系进行详细的阐释。通过高通量筛选FDA库的一千多种化合物,我们揭示并鉴定了一系列抗高血压的1,4-二氢吡啶类药物（DHPs）作为配体能够特异性地与FXR结合并产生不同的构象变化,进而促进FXR募集不同辅调节因子,尤其是类固醇激素受体辅激活因子（SRC2-3）,并诱导FXR的转录活性。为了进一步研究不同DHPs结合并调控FXR的分子和结构机理,本论文首次成功获得并解析出了四种DHPs分别与FXR/SRC2-3的晶体结构。通过对比这四种复合物的晶体结构,显示出DHPs和FXR配体结合口袋（LBD）的特异性结合模式,其主要表现为由一种含三个叶片的螺旋桨形状嵌入到LBD空腔中。通过对比发现与人工合成配体GW4064和鹅去氧胆酸（CDCA）在FXRLBD中结合位置不同的是,DHPs三叶片螺旋桨结构的叶片Ⅱ主要位于FXR LBD α螺旋H7和H11之间来形成一个较小的空间结合腔从而调控DHPs的结合灵活性。同时定点突变实验进一步从构效关系上分析四种DHPs激活FXR转录的独特能力,并且重点突出FXR LBD 口袋结合配体的灵活性以及突变氨基酸残基在特异性识别不同DHPs中的差异作用,进而共同实现对FXR功能的不同调节。为了进一步研究FXR功能,通过使用对乙酰氨基酚（Acetaminophen,APAP）诱导野生型（WT）和FXR敲除小鼠（KO）的急性肝损伤模型,发现西尼地平（Cilnidipine）预处理能够显着降低WT小鼠中血清的丙氨酸氨基转移酶ALT、天冬氨酸转氨酶AST和乳酸脱氢酶LDH水平,同时还增加肝脏中的谷胱甘肽转移酶GSH水平;但对FXR敲除鼠却没有明显影响,这表明西尼地平对小鼠肝损伤生化指标的调节是直接靶向FXR的。此外通过H&E染色观察到APAP过量导致小鼠肝切片中明显的肝小叶呈点状坏死,有大面积的受损和坏死区域等肝损伤病理学特征。西尼地平预处理能够极大程度地减轻APAP造成的肝组织损伤,然而在FXR敲除小鼠中肝损伤特征并没有得到改善,因此通过组织形态学分析认为西尼地平通过FXR改善肝损伤。其次,我们用TUNEL染色发现在APAP24h造模组的小鼠肝脏切片中有明显的细胞凋亡特征,并且凋亡的阳性肝细胞达到很高的比例,同时西尼地平预处理的WT组小鼠显着降低肝细胞的凋亡程度,但仍然对FXRKO小鼠没有影响,因此认为西尼地平也通过靶向FXR减弱肝细胞的凋亡来发挥保肝作用。另外,通过RT-PCR分析小鼠肝脏组织的基因表达,我们发现DHPs预处理WT小鼠可以上调FXR相关靶基因成纤维细胞生长因子FGF15,回肠胆汁酸结合蛋白iBABP和氮酸输出蛋白BSEP的mRNA水平,但在FXR KO小鼠没有这种变化。这些结果进一步证明DHPs作为FXR的特异性配体,是通过激活FXR来实现对其生理功能的调节。同时RT-PCR分析证实FXR的激活诱导谷胱甘肽硫转移酶Gsta3和谷胱甘肽GSH代谢相关基因（谷氨酸半胱氨酸连接酶Gclm,谷胱甘肽过氧化物酶Gpx1）的mRNA水平在西尼地平预处理的WT小鼠肝脏组织中显着上调,同样对FXRKO小鼠没有影响。因此认为西尼地平很可能通过激活FXR并随后上调这些肝脏相关基因的mRNA水平来发挥其保肝功能,再次证实DHPs通过FXR依赖性的方式调节肝脏基因表达实现肝脏保护的作用。鉴于DHPs已经长期作为抗高血压药物并广泛应用于临床治疗,我们的发现不仅为设计和开发下一代具有更多有益保肝作用的抗高血压Ca2+阻滞剂药物提供有价值的见解,同时也为以FXR为药物靶标的潜在治疗性药物的优化设计提供安全有效的结构模板。此外,基于新建立的药物-靶标关系,DHPs可能潜在地用于治疗高血压以外的FXR介导的相关疾病,我们的研究也为“老药”新功能的开发提供更强有力的筛选策略。
二、重组E.coli L-天冬酰胺酶在大鼠中的药物代谢动力学(英文)（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、重组E.coli L-天冬酰胺酶在大鼠中的药物代谢动力学(英文)（论文提纲范文）
（1）以红细胞为载体的治疗性酶递送系统（论文提纲范文）
| 1 红细胞负载酶策略 |
| 1.1 作为生物反应器 |
| 1.2 治疗性酶偶联到红细胞表面 |
| 1.3 基因工程化红细胞表达治疗性酶 |
| 2 临床前/临床研究 |
| 2.1 溶栓治疗 |
| 2.2 外源性化学品的解毒 |
| 2.3 代谢性疾病的治疗 |
| 2.3.1 线粒体神经胃肠脑肌病 |
| 2.3.2 苯丙酮尿症 |
| 2.3.3 高氨血症 |
| 2.4 癌症治疗 |
| 2.4.1 负载天冬酰胺酶 |
| 2.4.2 负载蛋氨酸γ-裂解酶 |
| 2.4.3 负载精氨酸脱亚胺酶 |
| 3 未来展望 |
（2）柴胡—白芍药对及其成分配伍增效抗抑郁作用与协同机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 第一章 文献综述 |
| 1 引言 |
| 2 柴胡-白芍药对配伍研究进展 |
| 2.1 柴胡-白芍药对配伍的化学机制研究 |
| 2.2 柴胡-白芍药对配伍的药代动力学机制研究 |
| 2.3 柴胡-白芍药对配伍的药理机制研究 |
| 2.3.1 柴胡、白芍的抗抑郁药理机制研究 |
| 2.3.2 柴胡-白芍药对的抗抑郁药理机制研究 |
| 2.4 小结 |
| 3 抑郁症研究概况 |
| 3.1 抑郁症发病机制研究现状 |
| 3.2 抗抑郁药物研究进展 |
| 3.2.1 抗抑郁西药 |
| 3.2.2 抗抑郁中药及天然药物 |
| 3.3 抑郁动物及细胞模型 |
| 3.3.1 抑郁动物模型 |
| 3.3.2 抑郁细胞模型 |
| 3.4 小结 |
| 4 药物协同作用研究概述 |
| 4.1 药物协同作用定义 |
| 4.2 药物协同作用评价方法 |
| 4.2.1 Loewe Additivity模型法 |
| 4.2.2 Bliss Independence模型法 |
| 4.2.3 Chou-Talalay模型法 |
| 4.3 小结 |
| 5 本课题的研究意义、思路、技术路线、内容及创新点 |
| 第二章 基于网络药理学的柴胡-白芍药对配伍抗抑郁作用的协同机制研究 |
| 1 引言 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 柴胡、白芍化学成分收集及抗抑郁成分筛选 |
| 2.2 抑郁症靶点收集 |
| 2.3 抗抑郁成分靶点预测及其抗抑郁靶点获取 |
| 2.4 抗抑郁成分-抗抑郁靶点网络构建 |
| 2.5 KEGG抗抑郁通路富集分析 |
| 2.6 抗抑郁靶点-抗抑郁通路网络构建 |
| 2.7 抗抑郁成分贡献指数分析 |
| 3 研究结果 |
| 3.1 柴胡-白芍抗抑郁成分及抗抑郁靶点 |
| 3.2 柴胡-白芍抗抑郁通路 |
| 3.3 柴胡-白芍抗抑郁成分贡献指数 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 第三章 柴胡-白芍药对配伍增效抗抑郁作用与协同机制研究 |
| 第一节 基于CUMS大鼠模型的柴胡-白芍药对配伍增效改善抑郁行为研究 |
| 1 引言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.3 统计方法 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 饮片提取物色谱分析 |
| 3.2 柴胡-白芍对CUMS大鼠体重的影响 |
| 3.3 柴胡-白芍对CUMS大鼠糖水偏好的影响 |
| 3.4 柴胡-白芍对CUMS大鼠旷场穿越格数的影响 |
| 3.5 柴胡-白芍对CUMS大鼠强迫游泳不动时间的影响 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 第二节 基于LC-MS代谢组学的柴胡-白芍药对配伍增效抗抑郁作用的协同机制研究 |
| 1 引言 |
| 1.1 血液和海马为药理研究中常用样本 |
| 1.2 PBMCs是一种用于抗抑郁药物作用机制研究的新样本 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.3 统计方法 |
| 3 研究结果 |
| 3.1 柴胡-白芍对CUMS大鼠血浆代谢的影响 |
| 3.2 柴胡-白芍对CUMS大鼠PBMCs代谢的影响 |
| 3.3 柴胡-白芍对CUMS大鼠海马代谢的影响 |
| 3.4 柴胡-白芍对CUMS大鼠血浆、PBMCs、海马代谢的比较分析 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 第三节 基于花生四烯酸代谢和嘌呤代谢的柴胡-白芍药对配伍增效抗抑郁作用的协同机制研究 |
| 1 引言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.3 统计方法 |
| 3 研究结果 |
| 3.1 柴胡-白芍对CUMS大鼠血浆花生四烯酸代谢的影响 |
| 3.2 柴胡-白芍对CUMS大鼠海马花生四烯酸代谢的影响 |
| 3.3 柴胡-白芍对CUMS大鼠海马嘌呤代谢的影响 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 第四节 基于MAPK/NF-κB/NLRP3 信号通路的柴胡-白芍药对配伍增效抗抑郁作用的协同机制研究 |
| 1 引言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.3 统计方法 |
| 3 研究结果 |
| 3.1 柴胡-白芍对CUMS大鼠海马MAPK/NF-κB/NLRP3 信号通路的影响 |
| 3.2 柴胡-白芍对CUMS大鼠海马炎症因子的影响 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 第四章 柴胡-白芍药对成分配伍协同抗抑郁作用与机制研究 |
| 第一节 基于皮质酮损伤PC12 细胞模型的柴胡-白芍药对抗抑郁活性成分筛选 |
| 1 引言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.3 统计方法 |
| 3 研究结果 |
| 3.1 皮质酮对PC12 细胞存活的影响 |
| 3.2 柴胡-白芍成分对PC12 细胞存活的影响 |
| 3.3 柴胡-白芍成分对皮质酮损伤PC12 细胞存活的影响 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 第二节 基于数学模型的柴胡皂苷A-芍药内酯苷配伍协同抗抑郁作用研究 |
| 1 引言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.3 统计方法 |
| 3 研究结果 |
| 3.1 柴胡皂苷A-芍药内酯苷对皮质酮损伤PC12 细胞存活的影响 |
| 3.2 柴胡皂苷A-芍药内酯苷对皮质酮损伤PC12 细胞乳酸脱氢酶释放的影响 |
| 3.3 柴胡皂苷A-芍药内酯苷对皮质酮损伤PC12 细胞凋亡的影响 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 第三节 基于LC-MS代谢组学的柴胡皂苷A-芍药内酯苷配伍协同抗抑郁作用机制研究 |
| 1 引言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.3 统计方法 |
| 3 研究结果 |
| 3.1 柴胡皂苷A-芍药内酯苷对皮质酮损伤PC12 细胞代谢物的影响 |
| 3.2 柴胡皂苷A-芍药内酯苷对皮质酮损伤PC12 细胞代谢通路的影响 |
| 3.3 细胞代谢组学结果与网络药理学结果关联分析 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 第四节 基于色氨酸代谢、TCA循环、嘌呤代谢、谷氨酸代谢通路的柴胡皂苷A-芍药内酯苷配伍协同抗抑郁作用机制研究 |
| 1 引言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.3 统计方法 |
| 3 研究结果 |
| 3.1 柴胡皂苷A-芍药内酯苷对皮质酮损伤PC12 细胞色氨酸代谢的影响 |
| 3.2 柴胡皂苷A-芍药内酯苷对皮质酮损伤PC12 细胞TCA循环的影响 |
| 3.3 柴胡皂苷A-芍药内酯苷对皮质酮损伤PC12 细胞嘌呤代谢的影响 |
| 3.4 柴胡皂苷A-芍药内酯苷对皮质酮损伤PC12 细胞谷氨酸代谢的影响 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 第五节 基于MAPK/NF-κB/NLRP3 信号通路的柴胡皂苷A-芍药内酯苷配伍协同抗抑郁作用机制研究 |
| 1 引言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.3 统计方法 |
| 3 研究结果 |
| 3.1 柴胡皂苷A-芍药内酯苷对皮质酮损伤PC12 细胞MAPK/NF-κB/NLRP3 信号通路的影响 |
| 3.2 柴胡皂苷A-芍药内酯苷对皮质酮损伤PC12 细胞炎症因子的影响 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 第五章 总结与展望 |
| 1 研究工作总结 |
| 2 不足和展望 |
| 参考文献 |
| 缩略词中英文对照表 |
| 攻读学位期间取得成果 |
| 致谢 |
| 个人情况及联系方式 |
（3）小菜蛾解毒酶对4类化合物的作用机理研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一章 文献综述 |
| 1.1 小菜蛾的危害及分布 |
| 1.2 小菜蛾的抗药性 |
| 1.2.1 小菜蛾的田间抗药性 |
| 1.2.2 昆虫抗药性机理 |
| 1.3 昆虫解毒酶 |
| 1.3.1 谷胱甘肽-S-转移酶 |
| 1.3.2 羧酸酯酶 |
| 1.3.3 细胞色素P450酶 |
| 1.4 斑蝥素、吡唑和嘧啶类及拟除虫菊酯类杀虫剂 |
| 1.4.1 斑蝥素 |
| 1.4.2 吡唑和嘧啶类杀虫杀螨剂 |
| 1.4.3 拟除虫菊酯类杀虫剂 |
| 1.5 昆虫解毒酶对杀虫剂的解毒代谢 |
| 1.6 研究的目的和意义 |
| 第二章 小菜蛾解毒酶系对斑蝥素的解毒代谢 |
| 2.1 材料与仪器 |
| 2.1.1 供试昆虫 |
| 2.1.2 试剂与材料 |
| 2.1.3 实验仪器 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 斑蝥素对小菜蛾的生物测定 |
| 2.2.2 亚致死剂量斑蝥素对小菜蛾的处理 |
| 2.2.3 斑蝥素处理后PSPs酶活性检测 |
| 2.2.4 斑蝥素处理后解毒酶系活性测定 |
| 2.2.5 统计分析方法 |
| 2.3 结果与讨论 |
| 2.3.1 斑蝥素对小菜蛾的胃毒活性 |
| 2.3.2 斑蝥素对小菜蛾的PSPs活性的影响 |
| 2.3.3 斑蝥素处理后小菜蛾解毒酶系活性的变化 |
| 2.4 小结 |
| 第三章 小菜蛾PxGSTs对唑虫酰胺的解毒代谢作用 |
| 3.1 材料与仪器 |
| 3.1.1 供试昆虫 |
| 3.1.2 试剂和材料 |
| 3.1.3 缓冲液配制 |
| 3.1.4 实验仪器 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.2.1 唑虫酰胺对小菜蛾的生物测定 |
| 3.2.2 唑虫酰胺对小菜蛾的处理 |
| 3.2.3 小菜蛾的RNA提取 |
| 3.2.4 用于实时定量PCR的 c DNA模板制作 |
| 3.2.5 实时定量PCR检测 |
| 3.2.6 PxGSTs基因合成和表达菌株构建 |
| 3.2.7 PxGSTs蛋白表达及纯化 |
| 3.2.8 PxGSTs重组蛋白酶动力学检测 |
| 3.2.9 杀虫剂对PxGSTs重组蛋白抑制检测 |
| 3.2.10 PxGSTs对唑虫酰胺的代谢效率测定 |
| 3.2.11 唑虫酰胺和PxGSTσ的结合模式分析 |
| 3.2.12 结合自由能运算 |
| 3.2.13 PxGSTσ基因定点突变与蛋白表达 |
| 3.3 结果与讨论 |
| 3.3.1 唑虫酰胺对小菜蛾的胃毒作用 |
| 3.3.2 唑虫酰胺处理后小菜蛾PxGSTs转录水平变化 |
| 3.3.3 PxGSTs重组蛋白的表达和动力学分析 |
| 3.3.4 杀虫剂在体外对PxGSTs重组蛋白的抑制作用 |
| 3.3.5 PxGSTs重组蛋白对唑虫酰胺的代谢效率测定 |
| 3.3.6 PxGSTσ与唑虫酰胺结合模式分析 |
| 3.3.7 PxGSTσ定点突变和代谢效率测定 |
| 3.4 小结 |
| 第四章 小菜蛾PxGSTs与其抑制剂GTX的相互作用 |
| 4.1 材料与仪器 |
| 4.1.1 试剂和材料 |
| 4.1.2 缓冲液配制 |
| 4.1.3 实验仪器 |
| 4.2 实验方法 |
| 4.2.1 3种PxGSTs的基因合成、蛋白表达与纯化 |
| 4.2.2 PxGSTs重组蛋白酶动力学检测 |
| 4.2.3 GTX对 PxGSTs重组蛋白的抑制作用 |
| 4.2.4 PxGSTσ蛋白三维结构的同源模建和PxGSTσ-GTX复合物结构 |
| 4.2.5 分子动力学(MD)模拟 |
| 4.2.6 结合自由能计算 |
| 4.2.7 结合自由能单残基能量分解 |
| 4.2.8 丙氨酸扫描计算 |
| 4.2.9 PxGSTσ基因定点突变、蛋白表达和抑制检测 |
| 4.2.10 统计分析方法 |
| 4.3 结果与讨论 |
| 4.3.1 GTX对 PxGSTs的抑制作用 |
| 4.3.2 PxGSTσ三维结构模型的构建 |
| 4.3.3 PxGSTσ-GTX复合物的分子动力学分析 |
| 4.3.4 PxGSTσ-GTX复合物结合模式分析。 |
| 4.3.5 结合自由能计算 |
| 4.3.6 氨基酸残基的自由能分解 |
| 4.3.7 基于CAS的定点突变 |
| 4.4 小结 |
| 第五章 小菜蛾羧酸酯酶PxEst-6 对拟除虫菊酯的代谢机理 |
| 5.1 材料与仪器 |
| 5.1.1 供试昆虫 |
| 5.1.2 试剂和材料 |
| 5.1.3 缓冲液配制 |
| 5.1.4 实验仪器 |
| 5.2 实验方法 |
| 5.2.1 拟除虫菊酯对小菜蛾的胃毒测定 |
| 5.2.2 拟除虫菊酯类杀虫剂对小菜蛾的处理 |
| 5.2.3 实时定量PCR检测 |
| 5.2.4 PxEst-6 基因合成和定点突变 |
| 5.2.5 PxEst-6 的表达和纯化 |
| 5.2.6 PxEst-6 酶活力和酶抑制分析 |
| 5.2.7 PxEst-6 对拟除虫菊酯类杀虫剂的代谢效率分析 |
| 5.2.8 PxEst-6 三维结构模型的构建 |
| 5.2.9 分子对接模拟 |
| 5.2.10 分子动力学(MD)模拟 |
| 5.2.11 结合自由能计算 |
| 5.2.12 统计分析方法 |
| 5.3 结果与讨论 |
| 5.3.1 4 种拟除虫菊酯对小菜蛾的毒杀作用 |
| 5.3.2 小菜蛾PxEst-6 的组织特异性表达 |
| 5.3.3 拟除虫菊酯处理后小菜蛾PxEst-6 转录水平变化 |
| 5.3.4 拟除虫菊酯对PxEst-6 的抑制活性以及PxEst-6 对拟除虫菊酯的代谢 |
| 5.3.5 4 种拟除虫菊酯与PxEst-6 的结合模式分析和分子动力学模拟 |
| 5.3.6 利用丙氨酸突变揭示4 种拟除虫菊酯代谢中的关键氨基酸 |
| 5.4 小结 |
| 第六章 结论与展望 |
| 6.1 结论 |
| 6.2 展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简介 |
（4）大肠杆菌ABC家族药物外排转运体YbhFSR及YddA功能的研究（论文提纲范文）
| 英文缩写列表 |
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一章 文献综述 |
| 1.1 研究背景 |
| 1.2 细菌药物外排泵 |
| 1.2.1 耐药结节化/细胞分裂家族药物外排转运体 |
| 1.2.2 主要易化子超家族 |
| 1.2.3 小多耐药家族外排转运体 |
| 1.2.4 多药及毒性化合物外排家族 |
| 1.2.5 PACE和 AbgT家族 |
| 1.3 ABC超家族 |
| 1.3.1 ABC家族蛋白的分类以及超家族的演变 |
| 1.3.2 ABC超家族转运体结构 |
| 1.3.3 ABC家族蛋白的功能 |
| 1.4 细菌ABC超家族转运体研究进展 |
| 1.4.1 细菌ABC家族多药耐药相关蛋白 |
| 1.4.2 E.coli ABC家族外排转运体研究进展 |
| 1.4.3 E.coli ABC转运体分类 |
| 1.5 项目研究的目的和意义 |
| 第二章 大肠杆菌ABC家族转运体YbhFSR功能的研究 |
| 2.1 前言 |
| 2.2 材料与方法 |
| 2.2.1 实验材料 |
| 2.2.2 实验方法 |
| 2.3 结果与分析 |
| 2.3.1 生物信息学分析 |
| 2.3.2 ybhS与 ybhR基因的克隆 |
| 2.3.3 ybhF基因与表达载体连接及蛋白表达 |
| 2.3.4 基因的敲除 |
| 2.3.5 YbhF蛋白的ATP酶活性 |
| 2.3.6 EB的外排实验 |
| 2.3.7 药物敏感性实验 |
| 2.3.8 荧光实验 |
| 2.3.9 耐药菌株的诱导及基因转录水平检测 |
| 2.3.10 YbhFSR转运体生理学功能研究 |
| 2.3.11 YbhF蛋白的定位 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 小结 |
| 第三章 大肠杆菌ABC家族药物转运蛋白YddA的克隆与功能研究 |
| 3.1 前言 |
| 3.2 材料与方法 |
| 3.2.1 实验材料 |
| 3.2.2 实验方法 |
| 3.3 结果与分析 |
| 3.3.1 生物信息学分析 |
| 3.3.2 基因的克隆 |
| 3.3.3 基因的敲除 |
| 3.3.4 药物敏感性实验 |
| 3.3.5 EB的外排与积累实验 |
| 3.3.6 诺氟沙星的积累与外排 |
| 3.3.7 抑制剂对诺氟沙星外排的影响 |
| 3.3.8 已知的MDR底物对诺氟沙星外排的影响 |
| 3.3.9 诺氟沙星上调yddA的转录水平 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 小结 |
| 第四章 结论与创新点及展望 |
| 4.1 结论 |
| 4.2 创新点 |
| 4.3 展望 |
| 附录 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简介 |
（5）葛花、枳椇子及其配伍对急性酒精性肝损伤小鼠保护作用的实验研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 第一部分 文献综述 |
| 综述一 急性酒精肝损伤发病机制及治疗研究现状 |
| 参考文献 |
| 综述二 葛花、枳椇子化学成分和药理作用研究进展 |
| 参考文献 |
| 综述三 酒精性肝损伤动物模型制备的研究进展 |
| 参考文献 |
| 前言 |
| 参考文献 |
| 第二部分 实验研究 |
| 实验一 葛花、枳椇子及其配伍对急性酒精性肝损伤小鼠肝脏保护作用的研究 |
| 材料 |
| 方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 实验二 葛花、枳椇子及其配伍对急性酒精性肝损伤小鼠乙醇浓度及乙醇脱氢酶活性的研究 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 实验三 葛花、枳椇子及其配伍对急性酒精性肝损伤小鼠肝脏抗氧化作用的研究 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 实验四 葛花、枳椇子及其配伍对急性酒精性肝损伤小鼠肝脏组织病理形态的影响 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 实验五 葛花、枳椇子及其配伍对急性酒精性肝损伤小鼠肝脏Keap1和Nrf2基因及蛋白表达的影响 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 实验六葛花、枳椇子及其配伍对急性酒精性肝损伤小鼠肝脏AQP9基因及蛋白表达的影响 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 结语 |
| 展望 |
| 致谢 |
| 附录 |
| 在学期间主要研究成果 |
| 个人简历 |
（6）川陈皮素抑制IL-21/IL-21R介导类风湿关节炎的炎症反应研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| abstract |
| 前言 |
| 1.类风湿关节炎 |
| 1.1 疾病介绍 |
| 1.2 滑膜成纤维细胞代谢与类风湿关节炎 |
| 1.3 细胞因子与类风湿关节炎 |
| 2.IL-21/IL-21R信号转导途径 |
| 2.1 IL-21/IL-21R产生及来源 |
| 2.2 IL-21/IL-21R对疾病的调节 |
| 2.3 IL-21/IL-21R与类风湿关节炎 |
| 3.JAK/STAT信号通路与类风湿关节炎 |
| 3.1 JAK/STAT信号通路 |
| 3.2 基本过程及调节 |
| 3.3 JAK/STAT与类风湿关节炎 |
| 4.川陈皮素药理性作用 |
| 4.1 名称介绍 |
| 4.2 药代动力学 |
| 4.3 药理作用 |
| 5.本研究的目的和内容 |
| 第一部分 :川陈皮素抑制IL-21/IL-21R介导类风湿关节炎炎症反应体外研究 |
| 材料与方法 |
| 1.1 研究对象 |
| 1.2 实验试剂及设备 |
| 1.3 实验过程 |
| 1.4 实验分析 |
| 1.5 统计学分析 |
| 结果 |
| 2.1 川陈皮素对MH7A细胞活力的影响 |
| 2.2 川陈皮素能够抑制IL-21受体的表达 |
| 2.3 川陈皮素抑制IL-21诱导的氧化应激反应 |
| 2.4 川成皮素抑制促炎细胞因子的表达 |
| 2.5 川陈皮素抑制IL-21 诱导的基质金属蛋白酶(MMPs)表达 |
| 2.6 川陈皮素的作用通过JAK1/STAT3 信号通路介导 |
| 讨论 |
| 研究结论 |
| 第二部分 :川陈皮素抑制IL-21/IL-21R介导类风湿关节炎炎症反应体内研究 |
| 材料与方法 |
| 1.1 研究对象 |
| 1.2 实验试剂及设备 |
| 1.3 实验试剂配置 |
| 1.4 实验过程 |
| 1.5 统计学分析 |
| 结果 |
| 2.1 模型成功率检测 |
| 2.2 形态学分析表明川陈皮素对类风湿关节炎的改善作用 |
| 2.3 ELISA检测IL-21R、TNF-α、IL-6、HMGB1、MMP-3及MMP-13 提示川陈皮素对类风湿关节炎炎症的的抑制效应 |
| 2.4 RT-PCR检测IL-21R、TNF-α、IL-6、MMP-3、MMP-13从m RNA水平进一步表明川陈皮素抑制类风湿关节炎炎症的水平 |
| 2.5 Western-blot检测IL-21R、TNF-α、IL-6、MMP-3、MMP-13、JAK1/STAT3从蛋白水平进一步充分表明川陈皮素的类风湿关节炎炎症抑制作用 |
| 讨论 |
| 研究结论 |
| 参考文献 |
| 综述 白细胞介素21在类风湿关节炎中的作用研究进展 |
| 参考文献 |
| 中英文缩略词 |
| 攻读学位期间公开发表的论文 |
| 致谢 |
（7）基于代谢组学的嫩椰子品质变化机制与控制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 1 介绍 |
| 1.1 椰子的概述 |
| 1.2 嫩椰子水的营养成分 |
| 1.3 代谢组学概述 |
| 1.4 代谢组学分析技术 |
| 1.4.1 样品分析 |
| 1.4.2 统计分析 |
| 1.5 嫩椰子水保鲜技术研究 |
| 1.6 该研究的研究意义、目的和内容 |
| 1.6.1 研究意义 |
| 1.6.2 研究目的 |
| 1.6.3 研究内容 |
| 2 材料和方法 |
| 2.1 试剂与仪器 |
| 2.1.1 试剂和消耗品 |
| 2.1.2 主要仪器 |
| 2.2 嫩椰子水在储藏过程中代谢组学研究方法 |
| 2.2.1 样品收集 |
| 2.2.2 理化指标的测定 |
| 2.2.3 有机酸含量的测定 |
| 2.2.4 UPLC-MS/MS分析 |
| 2.2.5 GC-MS分析 |
| 2.2.6 数据处理 |
| 2.2.7 多元统计分析 |
| 2.3 保鲜贮藏技术对嫩椰子的影响研究 |
| 2.3.1 不同温度下嫩椰子的保质期的研究 |
| 2.3.2 覆膜工艺对嫩椰子的保鲜效果研究 |
| 2.3.3 超声波灭酶保鲜技术工艺优化研究 |
| 2.3.4 复合保鲜技术对嫩椰子的保鲜效果研究 |
| 3 结果与分析 |
| 3.1 基于UPLC-MS/MS技术的嫩椰子水代谢组学分析 |
| 3.1.1 物理化学指标的变化 |
| 3.1.2 有机酸的变化 |
| 3.1.3 嫩椰子水储藏过程中的代谢轮廓分析 |
| 3.1.4 嫩椰子水的代谢组学分析 |
| 3.2 基于GC-MS技术的嫩椰子水代谢组学分析 |
| 3.2.1 嫩椰子水储藏过程中的代谢轮廓分析 |
| 3.2.2 嫩椰子水的代谢组学分析 |
| 3.3 差异代谢物的代谢通路分析 |
| 3.4 保鲜储存工艺对嫩椰子水保质期的影响 |
| 3.4.1 储存温度对嫩椰子水的保质期影响 |
| 3.4.2 覆膜工艺对嫩椰子水的品质影响 |
| 3.4.3 超声处理条件对嫩椰子水酶活性的影响 |
| 3.4.4 复合保鲜技术对嫩椰子的保质期影响 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
（8）基于代谢组学的孕激素去氢孕酮对斑马鱼的毒理效应（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 第1章 绪论 |
| 1.1 去氢孕酮 |
| 1.1.1 去氢孕酮简介 |
| 1.1.2 去氢孕酮对斑马鱼的毒性效应 |
| 1.2 代谢组学概述 |
| 1.2.1 研究对象 |
| 1.2.2 样品预处理与提取 |
| 1.2.3 代谢物检测技术 |
| 1.2.4 数据处理方法 |
| 1.2.5 代谢物生物功能解释 |
| 1.3 常见生物大分子及其小分子代谢物 |
| 1.3.1 蛋白质和氨基酸 |
| 1.3.2 核酸和核苷酸 |
| 1.3.3 碳水化合物 |
| 1.3.4 脂质 |
| 1.4 研究意义、思路和内容 |
| 1.4.1 研究意义 |
| 1.4.2 研究思路和内容 |
| 第2章 实验方法 |
| 2.1 毒性暴露实验 |
| 2.1.1 受试化合物 |
| 2.1.2 受试生物 |
| 2.1.3 实验设计 |
| 2.2 代谢组学测试方法 |
| 2.2.1 材料与试剂 |
| 2.2.2 代谢物提取方法 |
| 2.2.3 代谢组学仪器分析方法 |
| 2.2.4 代谢物组学据分析 |
| 2.3 红外光谱测试方法 |
| 2.3.1 样品前处理 |
| 2.3.2 红外光谱仪器分析 |
| 2.3.3 数据处理 |
| 2.4 组织切片分析方法 |
| 2.5 去氢孕酮测量方法 |
| 第3章 去氢孕酮对斑马鱼幼鱼的影响 |
| 3.1 斑马鱼性别分化与体重体长 |
| 3.2 代谢组学结果 |
| 3.2.1 总体结果概述 |
| 3.2.2 幼鱼代谢组学结果 |
| 3.3 红外光谱分析结果 |
| 3.3.1 整体结果概述 |
| 3.3.2 幼鱼红外光谱分析结果 |
| 3.4 去氢孕酮实际暴露浓度 |
| 3.5 讨论 |
| 3.5.1 去氢孕酮诱导卵母细胞退化 |
| 3.5.2 去氢孕酮抑制NF-κB/COX-2 通路 |
| 3.5.3 去氢孕酮抑制Wnt/β-catenin通路 |
| 3.5.4 去氢孕酮诱导p53 通路 |
| 3.6 小结 |
| 第4章 去氢孕酮对斑马鱼性腺的影响 |
| 4.1 组织切片结果 |
| 4.2 代谢组学结果 |
| 4.3 红外光谱分析结果 |
| 4.4 讨论 |
| 4.4.1 去氢孕酮促进斑马鱼卵母细胞发育与成熟 |
| 4.4.2 去氢孕酮促进斑马鱼排卵 |
| 4.4.3 去氢孕酮导致卵母细胞过熟 |
| 4.5 小结 |
| 第5章 去氢孕酮对斑马鱼脑部的影响 |
| 5.1 代谢组学结果 |
| 5.2 红外光谱分析结果 |
| 5.3 讨论 |
| 5.3.1 孕激素与神经系统的关系 |
| 5.3.2 孕激素与昼夜节律 |
| 5.3.3 昼夜节律影响体内新陈代谢 |
| 5.3.4 脂肪酸与节律紊乱 |
| 5.4 小结 |
| 第6章 去氢孕酮对斑马鱼肝脏的影响 |
| 6.1 组织切片结果 |
| 6.2 代谢组学结果 |
| 6.3 红外光谱分析结果 |
| 6.4 讨论 |
| 6.4.1 斑马鱼肝脏代谢的性别差异 |
| 6.4.2 CYP酶与脂质代谢性别差异 |
| 6.5 小结 |
| 第7章 全文结论与创新之处 |
| 7.1 主要结论 |
| 7.2 主要创新之处 |
| 7.3 研究展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简介及在学期间发表的学术论文与研究成果 |
（9）特异结合胶原的红细胞药物载体构建及脊髓损伤修复研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第1章 绪论 |
| 1.1 脊髓损伤的研究进展 |
| 1.1.1 脊髓损伤的特点与病理机制 |
| 1.1.2 脊髓损伤的修复策略与治疗现状 |
| 1.1.3 脊髓损伤中药物递送的研究进展 |
| 1.2 红细胞载药系统研究进展 |
| 1.2.1 红细胞的生理特点 |
| 1.2.2 红细胞载药方法 |
| 1.2.3 红细胞载药系统研究现状 |
| 1.3 紫杉醇在脊髓损伤修复中的应用 |
| 1.4 本课题的设计思路 |
| 第2章 实验材料与方法 |
| 2.1 实验试剂与材料 |
| 2.2 仪器与设备 |
| 2.3 溶液配制 |
| 2.4 实验步骤与方法 |
| 2.4.1 红细胞的分离 |
| 2.4.2 载药红细胞的制备 |
| 2.4.3 红细胞的电镜样品制备 |
| 2.4.4 血液学指标测定 |
| 2.4.5 体外稳定性实验 |
| 2.4.6 PTX的含量测定 |
| 2.4.7 多肽与红细胞结合的亲和性与特异性研究 |
| 2.4.8 胶原支架的制备 |
| 2.4.9 DiI染色 |
| 2.4.10 紫杉醇的体外释放 |
| 2.4.11 大鼠脊髓T10全横断损伤模型的建立 |
| 2.4.12 行为学评价 |
| 2.4.13 动物取材与标本制作 |
| 2.4.14 免疫组织化学染色与分析 |
| 2.4.15 统计方法与数据处理 |
| 第3章 可特异结合胶原的红细胞载药体系的构建 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 结果与讨论 |
| 3.2.1 红细胞药物载体的构建及形貌表征 |
| 3.2.2 载药红细胞的稳定性分析 |
| 3.2.3 载药红细胞载药指标评价 |
| 3.2.4 载药红细胞的缓释效果评价 |
| 3.2.5 多肽的合成与理化特性分析 |
| 3.2.6 多肽与红细胞结合的亲和性研究 |
| 3.2.7 多肽-红细胞与胶原的结合研究 |
| 3.2.8 支架上紫杉醇的体外释放 |
| 3.3 本章小结 |
| 第4章 大鼠脊髓损伤修复的研究 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 结果与讨论 |
| 4.2.1 大鼠的T10段脊髓损伤模型的建立 |
| 4.2.2 大鼠损伤区域神经元的生成情况 |
| 4.2.3 大鼠损伤区域神经纤维再生情况 |
| 4.2.4 大鼠损伤区域内胶质化研究 |
| 4.2.5 组织学观察 |
| 4.2.6 大鼠的运动功能恢复评价 |
| 4.3 本章小结 |
| 第5章 总结与展望 |
| 5.1 总结 |
| 5.2 展望 |
| 参考文献 |
| 附录 A 大鼠BBB运动评分表 |
| 附录 B 中英文缩略语对照表 |
| 致谢 |
| 在读期间发表的学术论文与取得的其它研究成果 |
（10）抗高血压1,4-二氢吡啶药物通过靶向核受体FXR保护肝脏的结构机理研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 1 前言 |
| 1.1 核受体概述 |
| 1.1.1 核受体分类 |
| 1.1.2 核受体功能域 |
| 1.1.3 核受体LBD的结构和功能 |
| 1.1.4 药物靶点核受体 |
| 1.2 法尼醇X受体FXR |
| 1.2.1 FXR研究进展 |
| 1.2.2 FXR配体介绍 |
| 1.2.3 FXR与配体复合物的晶体结构 |
| 1.2.4 FXR调节肝脏代谢 |
| 1.2.5 FXR和其它代谢 |
| 1.3 抗高血压药物 |
| 1.3.1 钙通道阻滞剂介绍 |
| 1.3.2 钙通道阻滞剂的作用机制 |
| 1.3.3 钙通道阻滞剂研究进展 |
| 1.3.4 老药新功能的研究 |
| 1.4 结构生物学研究 |
| 1.4.1 蛋白质结晶学 |
| 1.4.2 蛋白质晶体结构解析 |
| 1.4.3 蛋白质结构和药物研发 |
| 1.5 本论文的研究依据和思路 |
| 2 实验材料与方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 主要仪器设备 |
| 2.1.2 常用试剂和耗材 |
| 2.1.3 常用溶液配制 |
| 2.1.4 本论文所用的菌株和细胞系 |
| 2.1.5 本论文所用的主要载体 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 感受态细胞的制备 |
| 2.2.2 重组质粒构建 |
| 2.2.3 定点突变 |
| 2.2.4 靶标蛋白FXR LBD的表达 |
| 2.2.5 靶标蛋白FXR LBD的分离纯化 |
| 2.2.6 蛋白质和小分子复合物的晶体解析 |
| 2.2.7 Alpha辅因子结合实验 |
| 2.2.8 荧光素酶报告基因实验 |
| 2.2.9 小鼠实验 |
| 2.2.10 生化指标检测 |
| 2.2.11 组织的基因表达分析 |
| 2.2.12 组织学检测分析 |
| 2.2.13 数据统计分析 |
| 3. 实验结果 |
| 3.1 筛选鉴定一系列DHPs作为FXR的特异性配体 |
| 3.1.1 靶标蛋白FXR LBD的表达和纯化 |
| 3.1.2 靶向FXR蛋白高通量筛选配体化合物 |
| 3.1.3 DHPs对FXR LBD和不同辅因子结合能力的调节 |
| 3.1.4 DHPs对核受体FXR转录活性的影响 |
| 3.1.5 DHPs能够特异性地调节FXR转录活性 |
| 3.2 基于复合物晶体结构确定DHPs为FXR的激动剂 |
| 3.2.1 FXR/DHPs/SRC2-3蛋白复合物的制备 |
| 3.2.2 FXR/ DHPs /SRC2-3复合物结晶条件的筛选 |
| 3.2.3 FXR LBD/ DHPs /SRC2复合物晶体的结构解析 |
| 3.3 DHPs与FXR LBD复合物的构效分析 |
| 3.3.1 DHPs与FXR LBD结合模式的分析 |
| 3.3.2 DHPs与FXR LBD结合口袋和空腔的结构分析 |
| 3.3.3 DHPs与FXR LBD相互作用的分子机制 |
| 3.4 DHPs对急性肝损伤小鼠的调节作用 |
| 3.4.1 DHPs对肝损伤小鼠肝脏组织的病理变化影响 |
| 3.4.2 DHPs对肝损伤小鼠肝脏组织的生理指标分析 |
| 3.4.3 西尼地平以FXR依赖性方式调节肝损伤小鼠肝脏组织的病理变化 |
| 3.4.4 西尼地平以FXR依赖性方式调节小鼠肝损伤的生理指标 |
| 3.4.5 西尼地平以FXR依赖性方式调节APAP急性肝损伤小鼠肝脏细胞凋亡 |
| 3.4.6 西尼地平以FXR依赖性方式调节APAP肝损伤小鼠肝脏相关基因的表达 |
| 4. 讨论 |
| 4.1 DHPs作为FXR的特异性配体 |
| 4.2 DHPs和FXR结合的构效关系 |
| 4.3 DHPs配体调节FXR功能 |
| 5. 结论 |
| 参考文献 |
| 附录 中英文缩写对照表 |
| 在学期间发表的学术论文 |
| 致谢 |
四、重组E.coli L-天冬酰胺酶在大鼠中的药物代谢动力学(英文)（论文参考文献）
- [1]以红细胞为载体的治疗性酶递送系统[J]. 郑梦园,荣若男,邱明丰,苏靖. 临床药物治疗杂志, 2021(08)
- [2]柴胡—白芍药对及其成分配伍增效抗抑郁作用与协同机制研究[D]. 李肖. 山西大学, 2021(01)
- [3]小菜蛾解毒酶对4类化合物的作用机理研究[D]. 李一帆. 西北农林科技大学, 2021
- [4]大肠杆菌ABC家族药物外排转运体YbhFSR及YddA功能的研究[D]. 冯振月. 黑龙江八一农垦大学, 2020(08)
- [5]葛花、枳椇子及其配伍对急性酒精性肝损伤小鼠保护作用的实验研究[D]. 许皖. 北京中医药大学, 2020(04)
- [6]川陈皮素抑制IL-21/IL-21R介导类风湿关节炎的炎症反应研究[D]. 刘中兵. 苏州大学, 2020(06)
- [7]基于代谢组学的嫩椰子品质变化机制与控制研究[D]. 张芸兀. 海南大学, 2020(07)
- [8]基于代谢组学的孕激素去氢孕酮对斑马鱼的毒理效应[D]. 蒋宇霞. 中国科学院大学(中国科学院广州地球化学研究所), 2019(07)
- [9]特异结合胶原的红细胞药物载体构建及脊髓损伤修复研究[D]. 胡玲玲. 中国科学技术大学, 2019(02)
- [10]抗高血压1,4-二氢吡啶药物通过靶向核受体FXR保护肝脏的结构机理研究[D]. 魏益娟. 厦门大学, 2018(12)